Transfekcja komórek zwojowych siatkówki myszy za pomocą elektroporacji in vivo

Ogólnym celem poniższego eksperymentu jest transfekcja pojedynczych lub małych grup komórek zwojowych siatkówki za pomocą elektroporacji in vivo u myszy po urodzeniu w celu zbadania rozwoju wypustek siatkówki ugalnej. Osiąga się to poprzez chirurgiczne odsłonięcie gałki ocznej i wstrzyknięcie niewielkiej objętości roztworu DNA osocza bezpośrednio do siatkówki. W drugim etapie umieszcza się elektrody na gałce ocznej bezpośrednio nad miejscem wstrzyknięcia i aplikowane są impulsy elektryczne, które umożliwiają transfer DNA osocza do neuronów siatkówki.

Następnie, w pożądanym wieku, elektroporowane siatkówki i mózgi są pobierane w celu wizualizacji transfekowanych komórek zwojowych siatkówki i uzyskuje się ich projekcje do OUN, wyniki pokazują fluorescencyjne znakowanie zarówno dendrytów, jak i aksonalnych ARB znakowanych komórek zwojowych siatkówki w ich różnych podkorowych strukturach docelowych. Główną zaletą tej techniki w porównaniu z istniejącymi metodami, takimi jak elektroporacja siatkówki w macicy, jest to, że technika ta jest mniej inwazyjna i nie zakłóca wczesnych zdarzeń naprowadzania aksonów, takich jak skrzyżowanie na skrzyżowaniu wzrokowym. Pozwala nam również oznaczyć małą populację lub pojedyncze komórki zwojowe siatkówki u myszy po urodzeniu z precyzyjną kontrolą przestrzenną i czasową.