Name: Mikropreparacja mózgu szczura w celu ekstrakcji RNA lub białka z określonego regionu mózgu (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-08-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 31 s
Description: Poznaj techniki mikropreparacji mózgu szczura w celu ekstrakcji RNA i białka z określonych regionów. Ta metoda umożliwia badanie zmian molekularnych w chorobach neurodegeneracyjnych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Krok 1
Uśmierć szczura zgodnie z ustalonymi protokołami. Wyjmij mózg z czaszki i wypłucz go w lodowatej wodzie Milli Q traktowanej DEPC, aby usunąć krew z powierzchni.
Krok 2
Umieść na zimnej płycie metalowej. Przetnij mózg wzdłuż na pół, dzieląc go na prawą i lewą półkulę. <img src="/files/ftp_upload/old/269_2008_7_19_3/269_Figure-01.png" alt="Schemat sekcji mózgu; pokazuje ciało modzelowate, forging i sekwencję cięć do badania anatomicznego." width="474" height="224" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="269_Figure-01">
Rysunek 1. Pozycje cięć w widoku przyśrodkowym półkuli mózgu szczura  
Krok 3
Pobierz cebulki węchowe bezpośrednio po pierwszym cięciu. Próbkę zamroź błyskawicznie w ciekłym azocie i przechowuj w temperaturze -80°C. <img src="/files/ftp_upload/old/269_2008_7_19_4/269_Figure-02.png" alt="Disekcja cebulek węchowych z mózgu owcy; badanie anatomiczne, obraz z opisami." width="564" height="145" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="269_Figure-02">
Rycina 2. Disekcja opuszki węchowej
Krok 4
Pobierz korę czołową bezpośrednio po drugim cięciu, używając ostrza i pęsety Dumont nr 5. Zamroź gwałtownie próbkę w ciekłym azocie i przechowuj w temperaturze -80°C. <img src="/files/ftp_upload/old/269_2008_7_19_5/269_Figure-03.png" alt="Disekcja kory czołowej; eksperymentalne badanie anatomii mózgu; precyzyjna metoda ekstrakcji tkanki." width="566" height="220" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="269_Figure-03">
Rysunek 3. Disekcja kory przedczołowej
Krok 5
Pobierz prążkowie (jądro ogoniaste) bezpośrednio po trzecim cięciu, używając dwóch pęset Dumont No.5. Zamroź gwałtownie próbkę w ciekłym azocie i przechowuj w temperaturze -80°C. <img src="/files/ftp_upload/old/269_2008_7_19_6/269_Figure-04.png" alt="Schemat sekcji prążkowia szczura i otaczających go tkanek, z zaznaczeniem szczegółów anatomicznych." width="555" height="208" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="269_Figure-04">
Rysunek 4. Disekcja prążkowia (jądra ogona)
Krok 6
Aby pobrać hipokamp, należy ułożyć mózg stroną brzuszną do góry, a następnie usunąć śródmózgowie, aby odsłonić hipokamp. Wypreparować hipokamp z kory, używając dwóch pęset Dumont No.5. Próbkę zamrozić gwałtownie w ciekłym azocie i przechowywać w temperaturze -80°C. <img src="/files/ftp_upload/old/269_2008_7_19_7/269_Figure-05.png" alt="Procedura sekcji przedstawiająca wyodrębnianie hipokampa do analizy w badaniach neurobiologicznych." width="559" height="191" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="269_Figure-05">
Rysunek 5. Disekcja hipokampa

<ol><li>Palkovits, M. Maps and guide to micro-dissection of the rat brain. , Elsevier. New York. (c.1988).</li>
<li>Swanson, L. W. Brain maps: structure of the rat brain. 3rd revised edition. , Elsevier Academic Press. (2004).</li>
</ol>

Zwierzęta były traktowane zgodnie z protokołem wykorzystania zwierząt w badaniach zatwierdzonym przez Komitet ds. Wykorzystania Żywych Zwierząt w Nauczaniu i Badaniach (CULATR) na Uniwersytecie w Hongkongu oraz zgodnie z wytycznymi Narodowych Instytutów Zdrowia (National Institutes of Health) dotyczącymi wykorzystania zwierząt.

Różne obszary mózgu wiążą się z różnymi chorobami neurodegeneracyjnymi. Na przykład kora przedczołowa i prążkowie są powiązane z chorobą Parkinsona, natomiast hipokamp z chorobą Alzheimera. Precyzyjna mikrodisekcja mózgu pozwala na dokładniejsze wykrywanie zmian w mRNA i białkach w obszarach dotkniętych chorobą.

<table><tbody><tr><td>Mikroskop</td><td>Olympus Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Narzędzia do sekcji</td><td></td><td></td><td>Płyta metalowa, pęseta, skalpel itp. Indywidualnie zawinięte w folię aluminiową i ogrzewane w 180oC przez osiem godzin w celu usunięcia RNazy. Przed użyciem schłodzone do temperatury lodu. </td></tr></tbody></table>

mikrodysekcja mózgu szczura w celu ekstrakcji rna lub białek ze specyficznego obszaru mózgu

Micro-dissection of Rat Brain for RNA or Protein Extraction from Specific Brain Region

Mikrosekcja mózgu szczura z podziałem na poszczególne obszary jest niezwykle istotna w badaniach nad różnymi chorobami neurodegeneracyjnymi. Niniejszy film demonstruje mikrosekcję czterech głównych obszarów mózgu, w tym opuszki węchowej, kory czołowej, prążkowia i hipokampa, w świeżej tkance mózgu szczura. Przedstawiono przydatne wskazówki dotyczące szybkiego wyizolowania poszczególnych regionów w celu uniknięcia degradacji RNA i białek w tkance.

Mikrosekcja mózgu szczura z podziałem na poszczególne obszary jest niezwykle istotna dla badania różnych chorób neurodegeneracyjnych. Niniejszy film demonstruje mikrosekcję czterech głównych obszarów mózgu, w tym oparyczu węchowego, kory czołowej, prążkowia oraz hipokampa w świeżej tkance mózgowej szczura. Przedstawiono pomocne wskazówki dotyczące szybkiego usuwania poszczególnych regionów, aby zapobiec degradacji RNA i białek w tkance.

Mikrodysekcja mózgu szczura w celu ekstrakcji RNA lub białek ze specyficznego obszaru mózgu

Mikrodysekcja mózgu szczura z podziałem na poszczególne regiony jest niezwykle istotna dla badania różnych chorób neurodegeneracyjnych. Niniejszy film prezentuje...

Witajcie, jestem Quint z Katedry Anatomii Uniwersytetu w Hongkongu. Dzisiaj przedstawię sposób mikrosekcji szczurzego mózgu na cztery główne obszary: korę przedczołową, prążkowie, wzgórze oraz hipokamp. Oto schemat obrazujący sposób sekcji mózgu.Wykonuje się trzy cięcia. Pierwsza płaszczyzna cięcia znajduje się na połączeniu opuszki węchowej z korą czołową. Druga płaszczyzna cięcia przebiega przez ciało modzelowate.Trzecia płaszczyzna cięcia znajduje się przy przedniej końcówce phonics. Po trzech cięciach powstaną cztery ścieżki mózgowe. Po lewej stronie znajduje się czynnik.Po prawej stronie znajduje się hipokamp. Kora przedczołowa znajduje się pomiędzy pierwszym a drugim cięciem. Nukleaza kodująca, która jest częścią stratum, znajduje się pomiędzy drugim a trzecim cięciem na świeżej półkuli mózgu.Bardzo ważne jest, aby najpierw zidentyfikować ciałomóżdżkowe oraz strukturę fonacyjną. Następnie możemy łatwo zlokalizować trzy płaszczyzny cięcia. Pierwsza płaszczyzna cięcia znajduje się na połączeniu opuszki węchowej i kory przedczołowej.Druga płaszczyzna cięcia znajduje się na poziomie ciała modzelowatego, a trzecia płaszczyzna cięcia na przednim czubku prążkowia. Przystąpimy do sekcji mózgu pod mikroskopem. Narzędzia do sekcji są przechowywane w niskiej temperaturze.Po opłukaniu zimnej płyty metalowej wodą z DEPC, umieszczono mózg na płycie, dzieląc go na dwie półkule. Oddzielono i pobrano korę przedczołową, którą następnie przechowywano w ciekłym azocie. Następnie przystąpiono do pobierania kory czołowej. Wykonano cięcie wokół przedniej części ciała modzelowatego, pobrano korę czołową i przechowywano ją w ciekłym azocie.Następnie przeprowadzamy sekcję elementu słomkowego. Wykonujemy cięcie na poziomie przednim, w obrębie włókien przedniego komisury i fonicznych, oddzielamy jądro otaczające, pobieramy je i przechowujemy w ciekłym azocie. Na koniec dokonamy sekcji hipokampa.Najpierw należy usunąć śródmózgie, aby uzyskać dobrą ekspozycję hipokampa. Oddziel hipokamp zebrany i przechowywany w ciekłym azocie. Różne obszary mózgu są związane z różnymi chorobami neurodegeneracyjnymi. Na przykład prążkowie wiąże się z chorobą Parkinsona, natomiast kora przedczołowa i hipokamp wiążą się z chorobą Alzheimera.Precyzyjna mikrodisekcja mózgu pozwala na wykrycie zmian w poziomie mRNA i białek w danym regionie.

micro-dissection-rat-brain-for-rna-or-protein-extraction-from

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Mikrodysekcja mózgu szczura w celu ekstrakcji RNA lub białka z określonego obszaru mózgu

Profilowanie ekspresji RNA w oddzielnych regionach mózgu myszy wymaga precyzyjnej i powtarzalnej strategii pobierania tkanek. W niniejszym opracowaniu opisano protokół wykorzystujący zarówno sekcjonowanie mózgu w płaszczyźnie czołowej, jak i mikrodysekcję wspomaganą wycinakiem do tkanek. Wydajność i jakość całkowitego RNA uzyskanego z otrzymanych próbek potwierdzają użyteczność przedstawionej metody.

Metoda mikroskopii bez użycia laserowej mikrodysekcji do mikrodysekcji dyskretnych obszarów mózgu myszy w celu izolacji całkowitego RNA oraz późniejszego sekwencjonowania następnej generacji i profilowania ekspresji genów

Opisujemy szczurzy model zespołu stresu pourazowego (PTSD), który wykazuje trwałe zmiany w funkcji neuroendokrynnej oraz opóźnioną, długotrwałą i nasiloną reakcję lękową, charakterystyczną dla pacjentów z PTSD. Opisany tutaj model zwierzęcy oraz metody są przydatne do korelacji biomarkerów w jądrach mózgu, które mają charakter mechanistyczny, ale nie mogą być mierzone u pacjentów, z biomarkerami w obwodowych leukocytach, które podlegają pomiarowi.

Biomarkery w modelu zwierzęcym służące do ujawnienia korelatów neuronalnych, hematologicznych i behawioralnych PTSD

Ten film pokazuje proces izolowania mikronaczyń mózgowych od szczurów poddanych eutanazji. Obejmuje preparację mózgu, oczyszczanie tkanki i trawienie mechaniczne, a następnie wielokrotne wirowanie w celu wyizolowania czystej frakcji mikronaczyń.

Metoda izolacji jednostek nerwowo-naczyniowych z mózgu szczura

Ten film demonstruje wykrywanie syntezy RNA receptora serotoninowego za pomocą sond oligonukleotydowych w tkance mózgowej szczura dotkniętej zespołem serotoninowym. Protokół obejmuje wstępną obróbkę tkanek, hybrydyzację sondy i detekcję enzymatyczną w celu wizualizacji i ilościowego określenia ekspresji RNA receptora serotoninowego pod mikroskopem.

Hybrydyzacja in situ przy użyciu sond oligonukleotydowych do badania ekspresji RNA w skrawkach mózgu szczura

Opisujemy, jak korzystać z mikrodysekcji laserowej (LCM) w celu uzyskania wzbogaconych populacji neuronów hipokampa lub pojedynczych neuronów z zamrożonych fragmentów uszkodzonego mózgu szczura do późniejszej analizy ekspresji genów przy użyciu ilościowego PCR w czasie rzeczywistym i/lub mikromacierzy całego genomu.

Laserowe wychwytywanie mikrodysekcji wzbogaconych populacji neuronów lub pojedynczych neuronów do analizy ekspresji genów po urazowym uszkodzeniu mózgu

Analiza ekspresji genów w podzbiorze komórek w określonej tkance stanowi duże wyzwanie. W tym artykule opisano, jak wyizolować wysokiej jakości całkowite RNA z określonej populacji komórek, łącząc metodę szybkiego znakowania immunologicznego z mikrodysekcją wychwytu laserowego.

Izolacja RNA z subpopulacji specyficznych dla komórek za pomocą mikrodysekcji laserowej w połączeniu z szybkim znakowaniem immunologicznym

Tutaj opisana jest metoda izolacji mikronaczyń mózgowych szczurów i przygotowania próbek błonowych. Protokół ten ma wyraźną zaletę polegającą na wytwarzaniu wzbogaconych próbek mikronaczyń o akceptowalnej wydajności białka od poszczególnych zwierząt. Próbki można następnie wykorzystać do solidnych analiz białek w śródbłonku mikronaczyniowym mózgu.

Prosta i powtarzalna metoda przygotowania próbek błonowych ze świeżo wyizolowanych mikronaczyń mózgu szczura

Dostarczamy protokół izolacji mikrogleju z różnych wypreparowanych obszarów półkuli mózgu dorosłej myszy, a następnie półautomatyczne przygotowanie biblioteki do głębokiego sekwencjonowania RNA pojedynczej komórki transkryptomów pełnej długości. Metoda ta pomoże wyjaśnić funkcjonalną heterogeniczność mikrogleju w zdrowiu i chorobie.

Izolacja specyficznego dla regionu mikrogleju z jednej dorosłej półkuli mózgu myszy w celu głębokiego sekwencjonowania RNA pojedynczej komórki

Ta procedura opisuje zbieranie dyskretnie zamrożonych obszarów mózgu w celu uzyskania wysokiej jakości białka i RNA przy użyciu tanich i powszechnie dostępnych narzędzi.

Gromadzenie zamrożonych obszarów mózgu gryzoni do dalszych analiz

Przedstawiamy praktyczny, krok po kroku, szybki protokół usuwania mózgu myszy i preparowania dyskretnych obszarów z świeżej tkanki mózgowej. Pozyskiwanie regionów mózgu do analizy molekularnej stało się rutyną w wielu laboratoriach neurobiologicznych. Te obszary mózgu są natychmiast zamrażane w celu uzyskania wysokiej jakości danych transkryptomicznych do analizy na poziomie systemu.

Mikrodysekcja mózgu myszy na funkcjonalnie i anatomicznie różne regiony

Połączenie mikrodysekcji laserowej i mikroprzepływowego RT-qPCR zapewnia anatomiczną i biotechniczną specyfikę pomiaru transkryptomu w pojedynczych neuronach i gleju. Zastosowanie kreatywnych metod z systemowym podejściem biologicznym do chorób psychicznych może prowadzić do przełomów w zrozumieniu i leczeniu, takich jak hipoteza neurozapalenia i nagrody w uzależnieniu.

Badanie czynników wpływających na antynagrodę w zachowaniach uzależniających za pomocą anatomicznie specyficznych metod ekspresji genów jednokomórkowych

Poznaj techniki mikropreparacji mózgu szczura w celu ekstrakcji RNA i białka z określonych regionów. Ta metoda umożliwia badanie zmian molekularnych w chorobach neurodegeneracyjnych.

Mikrodysekcja mózgu szczura w celu ekstrakcji RNA lub białek ze specyficznego obszaru mózgu

Przeglądaj więcej filmów