Mikrodysekcja mózgu szczura w celu ekstrakcji RNA lub białek ze specyficznego obszaru mózgu
30 sierpnia 2007
Mikrosekcja mózgu szczura z podziałem na poszczególne obszary jest niezwykle istotna dla badania różnych chorób neurodegeneracyjnych. Niniejszy film demonstruje mikrosekcję czterech głównych obszarów mózgu, w tym oparyczu węchowego, kory czołowej, prążkowia oraz hipokampa w świeżej tkance mózgowej szczura. Przedstawiono pomocne wskazówki dotyczące szybkiego usuwania poszczególnych regionów, aby zapobiec degradacji RNA i białek w tkance.
Witajcie, jestem Quint z Katedry Anatomii Uniwersytetu w Hongkongu. Dzisiaj przedstawię sposób mikrosekcji szczurzego mózgu na cztery główne obszary: korę przedczołową, prążkowie, wzgórze oraz hipokamp. Oto schemat obrazujący sposób sekcji mózgu.
Wykonuje się trzy cięcia. Pierwsza płaszczyzna cięcia znajduje się na połączeniu opuszki węchowej z korą czołową. Druga płaszczyzna cięcia przebiega przez ciało modzelowate.
Trzecia płaszczyzna cięcia znajduje się przy przedniej końcówce phonics. Po trzech cięciach powstaną cztery ścieżki mózgowe. Po lewej stronie znajduje się czynnik.
Po prawej stronie znajduje się hipokamp. Kora przedczołowa znajduje się pomiędzy pierwszym a drugim cięciem. Nukleaza kodująca, która jest częścią stratum, znajduje się pomiędzy drugim a trzecim cięciem na świeżej półkuli mózgu.
Bardzo ważne jest, aby najpierw zidentyfikować ciałomóżdżkowe oraz strukturę fonacyjną. Następnie możemy łatwo zlokalizować trzy płaszczyzny cięcia. Pierwsza płaszczyzna cięcia znajduje się na połączeniu opuszki węchowej i kory przedczołowej.
Druga płaszczyzna cięcia znajduje się na poziomie ciała modzelowatego, a trzecia płaszczyzna cięcia na przednim czubku prążkowia. Przystąpimy do sekcji mózgu pod mikroskopem. Narzędzia do sekcji są przechowywane w niskiej temperaturze.
Po opłukaniu zimnej płyty metalowej wodą z DEPC, umieszczono mózg na płycie, dzieląc go na dwie półkule. Oddzielono i pobrano korę przedczołową, którą następnie przechowywano w ciekłym azocie. Następnie przystąpiono do pobierania kory czołowej. Wykonano cięcie wokół przedniej części ciała modzelowatego, pobrano korę czołową i przechowywano ją w ciekłym azocie.
Następnie przeprowadzamy sekcję elementu słomkowego. Wykonujemy cięcie na poziomie przednim, w obrębie włókien przedniego komisury i fonicznych, oddzielamy jądro otaczające, pobieramy je i przechowujemy w ciekłym azocie. Na koniec dokonamy sekcji hipokampa.
Najpierw należy usunąć śródmózgie, aby uzyskać dobrą ekspozycję hipokampa. Oddziel hipokamp zebrany i przechowywany w ciekłym azocie. Różne obszary mózgu są związane z różnymi chorobami neurodegeneracyjnymi. Na przykład prążkowie wiąże się z chorobą Parkinsona, natomiast kora przedczołowa i hipokamp wiążą się z chorobą Alzheimera.
Precyzyjna mikrodisekcja mózgu pozwala na wykrycie zmian w poziomie mRNA i białek w danym regionie.
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych
Przegląd
W tym filmie zaprezentowano mikro-disekcję tkanki mózgu szczura z podziałem na cztery główne regiony: cebulkę węchową, korę czołową, prążkowie oraz hipokamp. Zawiera on przydatne wskazówki dotyczące szybkiego usuwania tych obszarów w celu zapobiegania degradacji RNA i białek.
Kluczowe elementy badania
Dziedzina nauki
- Neuronauka
- Neuroanatomia
- Choroby neurodegeneracyjne
Wstęp
- Mikrosekcja jest kluczowa dla badania obszarów mózgu.
- Zrozumienie różnych chorób neurodegeneracyjnych wymaga precyzyjnych próbek tkanek.
- Zachowanie integralności RNA i białek jest niezbędne dla rzetelności badań.
- W niniejszym badaniu do sekcji wykorzystano świeżą tkankę mózgu szczura.
Cel badania
- Zaprezentowanie skutecznych technik dysekcji obszarów mózgu.
- Przedstawienie wskazówek dotyczących zachowania jakości tkanki podczas dysekcji.
- Umożliwienie prowadzenia badań nad chorobami neurodegeneracyjnymi poprzez prawidłowe pobieranie próbek.
Zastosowane metody
- Mikrodysekcja mózgu szczura w celu wyodrębnienia określonych obszarów.
- Wykorzystanie schematów obrazowych do prowadzenia procesu dysekcji.
- Zastosowanie specyficznych płaszczyzn cięcia dla dokładnego usunięcia obszarów.
- Wskazówki dotyczące minimalizacji degradacji RNA i białek podczas dysekcji.
Główne wyniki
- Pomyślna dyssekcja cebulki węchowej, kory czołowej, prążkowia i hipokampa.
- Zaprezentowane techniki pozwalające zachować integralność tkanki.
- Dostarczone pomoce wizualne w celu lepszego zrozumienia procesu dyssekcji.
- Podkreślenie znaczenia szybkiego usunięcia tkanek w celu uniknięcia ich degradacji.
Wnioski
- Mikrosekcjonowanie jest cenną techniką w badaniach nad neuronauką.
- Właściwe metody mogą znacząco poprawić jakość próbek tkanek.
- Techniki te mogą pomóc w badaniu chorób neurodegeneracyjnych.
Najczęściej zadawane pytania
Znaczenie dla przemysłu
Precyzyjna mikrodysekcja obszarów mózgu szczura umożliwia wysokiej jakości izolację RNA i białek do późniejszych analiz molekularnych w badaniach nad neurodegeneracją. Możliwość ta jest kluczowa dla walidacji celów terapeutycznych oraz ograniczania ryzyka mechanistycznego we wczesnych etapach procesów odkrywania leków, skoncentrowanych na mechanizmach chorobowych specyficznych dla danych regionów. Niezawodny pobór próbek regionalnych wspiera ciągłość translacyjną i podejmowanie decyzji w zakresie portfolio w procesie poszukiwania leków na schorzenia ośrodkowego układu nerwowego.
Strategiczne zastosowania w badaniach i rozwoju biofarmaceutycznym
Wczesne etapy odkrywania i walidacja celu
- Umożliwia izolację istotnych dla choroby obszarów mózgu w celu profilowania molekularnego.
- Wspiera funkcjonalną walidację celów poprzez powiązanie zmian specyficznych dla regionu z patologią neurodegeneracyjną.
- Ułatwia ograniczanie ryzyka mechanistycznego, umożliwiając precyzyjne testowanie hipotez w określonych kontekstach anatomicznych.
Przesiewy i opracowywanie testów
- Zapewnia wysokiej jakości próbki tkanek niezbędne do opracowania powtarzalnych testów molekularnych.
- Gwarantuje integralność RNA i białek, co umożliwia uzyskanie ilościowych wyników w kolejnych etapach analizy.
- Standaryzuje przygotowanie próbek, poprawiając porównywalność testów oraz wiarygodność analizy przesiewowej.
Badania translacyjne i przedkliniczne
- Umożliwia dopasowanie modeli przedklinicznych do chorób ludzkich poprzez celowanie w homologiczne obszary mózgu.
- Umożliwia odkrywanie i walidację biomarkerów w tkankach istotnych pod kątem anatomicznym.
- Wspiera rozwój z uwzględnieniem ryzyka, dostarczając solidnych danych molekularnych z określonych regionów.
Integracja procesów i przepływu pracy
Niniejszy protokół mikrodissekcji integruje etapy wczesnego odkrywania oraz badań przedklinicznych, umożliwiając specyficzne dla regionu analizy molekularne, które pomagają w wyborze punktów uchwytu i priorytetyzacji związków wiodących.
- Biologia odkrywcza: Ułatwia weryfikację hipotez dotyczących mechanizmów neurodegeneracyjnych w poszczególnych regionach mózgu.
- Przesiewanie: Dostarcza zestandaryzowane próbki o wysokiej integralności do opracowywania testów i oceny związków.
- Analityka: Wspiera ilościowy pomiar zmian w poziomie RNA i białek w różnych obszarach mózgu.
- Badania translacyjne: Łączy wyniki przedkliniczne z istotnością kliniczną poprzez koncentrację na regionach zaangażowanych w proces chorobowy.
- Ponowne wykorzystanie w przedsiębiorstwie: Ustanawia powtarzalny schemat przygotowania tkanek, który można zastosować w programach badawczych nad OUN.
Wpływ operacyjny i przedsiębiorczy
- Wartość naukowa: Zwiększa pewność prognostyczną w odniesieniu do specyficznych dla regionu wyników molekularnych.
- Wartość operacyjna: Poprawia powtarzalność i standaryzację przetwarzania tkanek.
- Wartość strategiczna: Usprawnia podejmowanie decyzji o kontynuacji lub przerwaniu badań (go/no-go) poprzez redukcję niejednoznaczności biologicznej w procesach analizy ośrodkowego układu nerwowego (CNS).
- Wpływ na portfolio: Umożliwia priorytetyzację celów w chorobach neurodegeneracyjnych z uwzględnieniem analizy ryzyka.
Wskazówki dotyczące wdrożenia
- Wymaga wiedzy anatomicznej w celu dokładnej identyfikacji obszarów i przeprowadzenia sekcji.
- Wymaga zachowania łańcucha chłodniczego i szybkiego przetwarzania w celu zachowania integralności RNA i białek.
- Wymaga zstandaryzowanych protokołów dla zapewnienia powtarzalności wyników między zespołami.
- Może wymagać dostosowania do różnych modeli gryzoni lub obszarów mózgu.
- Zależność od dostępu do specjalistycznych narzędzi sekcyjnych i infrastruktury krio-konserwacji.
