Name: Jednogarnkowa synteza N-sukcynimidylo-4- 18F fluorobenzoesanu ( 18F SFB wspomagana mikrofalami) (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-06-28T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 33 s
Description: Poznaj uproszczoną jednogarnkową syntezę [18F]SFB wspomaganą mikrofalami do znakowania biomolekuł w obrazowaniu PET. Ta metoda eliminuje etapy oczyszczania pośredniego, zapewniając wysoką wydajność radiochemiczną i czystość produktu.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Niniejsza praca była wspierana przez Departament Energii USA (DE-FG02-09ER09-08 i DE-PS02-09ER09-18), Jonsson Comprehensive Cancer Center na UCLA oraz program Industry-University Cooperative Research Program (UC Discovery Grant, bio07-10665). Dziękujemy dr. Nagichettiar Satyamurthy oraz pracownikom UCLA Biomedical Cyclotron Facility za dostarczenie radioizotopu F-18 i wiele cennych dyskusji. Dziękujemy dr. Michaelowi Collinsowi, Gregowi Leblancowi, Josephowi Lambertowi oraz Kellerowi Barnhardtowi z firmy CEM za wsparcie i doradztwo techniczne. Dziękujemy Dirkowi Williamsowi, Darinowi Williamsowi, dr. Josephowi Hong Dun Lin oraz dr. Michaelowi van Damowi za zaprojektowanie i wykonanie części do modyfikacji reaktora mikrofalowego CEM oraz za moduły oczyszczania SPE.

1. Przygotowania wstępne
<ol>
<li>Fiolka V-vial (5-mL) RV1 (z mieszadełkiem magnetycznym) służy jako główne naczynie reakcyjne do przeprowadzania syntezy mikrofalowej. Jest ona połączona z adapterem PEEK z siedmioma portami wlotowymi/wylotowymi i umieszczona w komorze mikrofalowej (patrz Rysunek 2). RV2 jest połączona z kartridżem SPE (I) w celu zbierania surowego produktu [18F]SFB. RV3 jest połączona z kartridżem SPE (II) do zbierania końcowego roztworu [18F]SFB. Może ona zostać umieszczona w ciepłej kąpieli wodnej (40°C) w celu zagęszczenia odpowiedniego roztworu przed jego rozpuszczeniem w buforze PBS, szczególnie na potrzeby późniejszego znakowania radiochemicznego biomolekuł.</li>
<li>Przygotowanie do zbierania surowego [18F]SFB: Napełnić zbiorniki A, B i C odpowiednio roztworem MeCN/H2O [6 mL; 1:4 (v:v)], 5% wodnym AcOH (8 mL) oraz MeCN (2 mL). Następnie aktywować kartridż SPE (I) (polistyrenowy, Merck LiCholut EN) etanolem (10 mL), a następnie przemyć 5% wodnym AcOH (10 mL).</li>
<li>Przygotowanie do zbierania oczyszczonego [18F]SFB: Przygotować zbiorniki D i E, napełniając je odpowiednio 10 ml H2O i 3 ml eteru dietylowego. Drugi kartridż SPE (II) (polistyrenowy, Merck LiCholut EN) aktywuje się zgodnie z procedurą opisaną powyżej.</li>
<li>Uruchomić HPLC (bufor eluujący: MeCN/ H2O, 1:1 (v/v) zawierający 0,2% TFA; przepływ: 3 ml/min) w celu wstępnego kondycjonowania kolumny HPLC [kolumna półpreparatywna w odwróconej fazie (Luna, 5 μm C18(2) 100 Å, 250 x 10 mm), Phenomenex, Torrance, CA, USA].</li>
</ol>
2. Przygotowanie suszonego [tj. bez dodatku nośnika, (n.c.a)] fluorku [18F]
<ol>
<li>Roztwór [18F]fluorku w [18O]H2O (100 μL) dodano do mieszaniny Kryptofix 222 (20 mg), 1M wodnego K2CO3 (26 μL) i MeCN (0,8 mL) w probówce Eppendorf. Cały roztwór dokładnie wymieszano przed przeniesieniem do RV1 za pomocą linii wlotowej 1. Roztwór [18F]fluorku można również przepuścić przez kartridż do wymiany anionowej (np. QMA-light Sep-Pak firmy Waters), aby wyłapać fluor-18, a następnie eluować mieszaniną K2CO3 i Kryptofix w MeCN.</li>
<li>Należy uruchomić sekwencję suszenia (20W, 3 min) w programie sterowania mikrofalowego, aby usunąć pozostałą wodę z RV1 [pod próżnią]. Po schłodzeniu systemu do temperatury poniżej 50°C do reaktora wprowadzono dodatkowy MeCN (1,0 mL) i powtórzono sekwencję raz.</li>
</ol>
3. Synteza benzoesanu etylu 4-[18F]fluorowanego
<ol>
<li>Do RV1, poprzez linię wlotową 2, dodano roztwór w DMSO (0.4 mL) zawierający triflan etylo-4-(N,N,N-trimetyloamoniowy)benzoesanu (1.5 mg).</li>
<li>W programie sterowania mikrofalą wykonano sekwencję znakowania (50W, 1 min) przy jednoczesnym mieszaniu, chłodzeniu naczynia i zamknięciu wszystkich zaworów, aby otrzymać etylo-4-[18F]fluorobenzoesan ([18F]2).</li>
</ol>
4. Synteza benzoesanu 4-[18F]fluoropotasu
<ol>
<li>Do RV1 przez linię doprowadzającą 3 dodano roztwór DMSO (0,5 mL) zawierający KOtBu (13 mg).</li>
<li>W programie sterowania mikrofalą, przy włączonym mieszaniu, chłodzeniu naczynia i zamkniętych zaworach, wykonano program Deprotect (40 W, 1 min), aby otrzymać sól 4-[18F]fluorobenzoesanu ([18F]3).</li>
</ol>
5. Synteza surowego [18F]SFB
<ol>
<li>Do RV1 za pomocą linii wlotowej 6 dodano roztwór TSTU (30 mg) w acetonitrylu (2.5 mL). TSTU jest wrażliwy na wilgoć i światło. Należy go podzielić na małe porcje w fiolkach i przechowywać w temperaturze 4°C w zamkniętym pojemniku owiniętym folią aluminiową.</li>
<li>Należy uruchomić sekwencję sprzęgania (30W, 2 min) w programie sterowania mikrofalą przy jednoczesnym mieszaniu, chłodzeniu naczynia i zamknięciu wszystkich zaworów, aby otrzymać surowy [18F]SFB.</li>
</ol>
6. Przygotowanie [18F]SFB oczyszczonego metodą SPE
<ol>
<li>Do RV1 przez linię wlotową 7 dodano 5% wodny roztwór AcOH (1,0 mL) w celu neutralizacji mieszaniny reakcyjnej. Następnie roztwór przeniesiono do fiolki B zawierającej 8 ml 5% wodnego roztworu AcOH (Rysunek 2).</li>
<li>Przepuść rozcieńczoną mieszaninę reakcyjną przez kartridż SPE (I), aby wychwycić surowy [18F]SFB, używając azotu (10 psi).</li>
<li>Przepłucz kartridż SPE (I) mieszaniną MeCN i H2O [10 mL, 1:4 (v:v)] z rezerwuaru A.</li>
<li>[18F]SFB eluoowano do RV2, używając MeCN (2 mL) z rezerwuaru C.</li>
</ol>
7. Oczyszczanie surowego [18F]SFB za pomocą radio-HPLC
<ol>
<li>Rozcieńczyć surowe [18F]SFB lub [18F]SFB oczyszczone metodą SPE w H2O (2 mL) w RV2, a następnie przenieść mieszaninę do pętli HPLC (5 mL). Roztwór wstrzyknięto do układu radio-HPLC [MeCN/ H2O, 1:1 (v/v) z dodatkiem 0,2% TFA; szybkość przepływu: 3 mL/min].</li>
<li>Frakcję zawierającą oczyszczone [18F]SFB (czas retencji: 8-10 minut) zebrać do fiolki D (wypełnionej wcześniej 10 ml H2O) (Rysunek 2). Krok krytyczny: przy prawidłowym wykonaniu objętość zebranej tutaj frakcji powinna wynosić 4-5 ml.</li>
<li>Przepuścić rozcieńczoną mieszaninę reakcyjną przez kartridż SPE (II) w celu wychwycenia oczyszczonego [18F]SFB, używając azotu (10 psi). Osuszyć kartridż strumieniem azotu przez 2-3 minuty.</li>
<li>[18F]SFB eluowano do RV3 za pomocą dietyloeteru (3 mL) z rezerwuaru E.</li>
<li>Odparować rozpuszczalnik w RV3 do suchości łagodnym strumieniem gazowego azotu (10 psi), stosując łaźnię wodną (40° C). Ostateczny, wysuszony produkt [18F]SFB można rozpuścić w buforze PBS do dalszych zastosowań.</li>
</ol>
8. Reprezentatywne wyniki:
Opracowaliśmy uproszczoną, szybką, jednoczłonową metodę syntezy [18F]SFB, wykorzystując strategię deprotekcji w warunkach bezwodnych oraz ogrzewanie mikrofalowe podczas każdej transformacji radiochemicznej/chemicznej. Rycina 1 przedstawia szczegóły naszej radiosyntezy. Tożsamość produktu końcowego potwierdzono poprzez porównanie czasu retencji w metodzie HPLC z niepromiennym wzorcem SFB. Oczyszczony [18F]SFB poddano również analizie za pomocą radio-TLC i radio-HPLC w celu określenia jego czystości radiochemicznej i chemicznej. WYR [18F]SFB wyniosło 35 ± 5% w ciągu 60 min po oczyszczaniu metodą HPLC (n &gt; 30), przy wysokiej czystości radiochemicznej (&gt;99%) i dobrej czystości chemicznej (patrz. ślad UV w profilu HPLC, Rycina 3). Aktywność swoista wynosiła ok. 67-330 GBq/μmol (1.8-9.0 Ci/μmol), w zależności od początkowej radioaktywności.
<img src="/files/ftp_upload/2755/2755fig1.jpg" alt="Proces syntezy [18F]SFB; schemat reakcji chemicznej, obejmujący [K2.2.2][18F]F oraz oczyszczanie metodą HPLC." data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="Rycina 1"> 
Rycina 1. Jednoetapowa radiosynteza [18F]SFB wspomagana mikrofalowo. Najpierw przeprowadzono radiofluorowanie triflanu benzoesanu etylu 4-(N,N,N-trimetyloamoniowego) (1) przy ogrzewaniu mikrofalowym (50 W, 1 min) w obecności kompleksu [K⊃2.2.2][18F]F- w dimetylosulfotlenku (DMSO), co pozwoliło na otrzymanie benzoesanu etylu 4-[18F]fluorowego ([18F]2). Bez oczyszczania dodano roztwór tert-tlenku potasu (tBuOK) w DMSO, a naczynie reakcyjne naświetlano mikrofalowo (40 W, 1 min), aby przeprowadzić bezwodną deprotekcję. Końcową konwersję [18F]3 do [18F]SFB osiągnięto poprzez aktywację za pomocą tetrafluoroboranu O-(N-sukcynimidylo)-N,N,N',N'-tetrametyluroniowego (TSTU). TSTU w acetonitrylu dodano do mieszaniny reakcyjnej zawierającej sól 4-[18F]fluorobenzoesanu ([18F]3); ten ostatni etap syntezy po ogrzewaniu (30 W, 2 min) pozwolił na otrzymanie surowego [18F]SFB.
<img src="/files/ftp_upload/2755/2755fig2.jpg" alt="Schemat syntezy radiomarkowania; reakcja z fluorkiem, oczyszczanie za pomocą HPLC, SPE; układ chemiczny." data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="Rysunek 2"> 
Rysunek 2. Schematyczny rysunek układu do jednoczłonowej syntezy [18F]SFB wspomaganej mikrofalowo.
<img src="/files/ftp_upload/2755/2755fig3.jpg" alt="Wykres chromatograficzny pokazujący czas retencji UV i radioaktywności dla analizy rozdziału związków." data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="Rysunek 3"> 
Rysunek 3. Chromatogramy Radio-HPLC końcowego [18F]SFB. Góra: sygnał UV przy 254 nm; dół: sygnał radioaktywny; wstawka: sygnał UV przy 254 nm (x 33,3).
<img src="/files/ftp_upload/2755/2755table1.jpg" alt="Tabela metod reakcji fluorowania, wydajność radiochemiczna, porównanie czasu syntezy, analiza chemiczna." data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="Tabela 1"> 
Tabela 1. Podsumowanie radiosyntez [18F]SFB opisanych w literaturze z wykorzystaniem triflanu alkilowego 4-(trimetyloamoniowy)benzoesanu jako prekursorów.

Metoda ta została zgłoszona do uzyskania patentu w USA.

Ta uproszczona, trzyetapowa radiosynteza odczynnika do acylacji 18F- [18F]SFB w jednym naczyniu (one-pot) została opracowana w oparciu o chemię niewodną. Proces ten charakteryzuje się doskonałą powtarzalnością i może być niezawodnie wykorzystywany do produkcji [18F]SFB w zautomatyzowanych modułach radiochemicznych dzięki dwóm kluczowym modyfikacjom opisanym poniżej: 1. Zastosowano etap deprotekcji/zmydlania w bezwodnym układzie KOtBu/DMSO, zastępując powszechnie stosowane wodne roztwory z...

<table><tbody><tr><td>kwas octowy w roztworze wodnym (5%, v/v)</td><td>Fisher Scientific</td><td>A38-500&lt;strong&gt; &lt;/strong&gt;</td><td>Przygotowano w naszym laboratorium</td></tr><tr><td>Acetonitryl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>75-05-8</td><td></td></tr><tr><td>Eter dietylowy</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>14775</td><td></td></tr><tr><td>Dimetylosulfotlenek (DMSO)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>472301</td><td></td></tr><tr><td>benzoesan triflan etylu 4-(&lt;em&gt;N&lt;/em&gt;,&lt;em&gt;N&lt;/em&gt;,&lt;em&gt;N&lt;/em&gt;-trimetyloamoniowy)</td><td>Przygotowano w laboratorium</td><td></td><td></td></tr><tr><td>4,7,13,16,21,24-heksaocha-1,10-diazabicyklo[8.8.8]heksakosan (K222)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>29,111-0</td><td></td></tr><tr><td>&lt;em&gt;O&lt;/em&gt;-(&lt;em&gt;N&lt;/em&gt;-sukcynymidylo)-&lt;em&gt;N&lt;/em&gt;,&lt;em&gt;N&lt;/em&gt;,&lt;em&gt;N&lt;/em&gt;&amp;rsquo;,&lt;em&gt;N&lt;/em&gt;&amp;rsquo;-tetrametylouronio tetrafluoroboran (TSTU)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>105832-38-0</td><td></td></tr><tr><td>Węglan potasu w roztworze wodnym (1M)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>209619</td><td>Przygotowano w naszym laboratorium</td></tr><tr><td>Tert-tlenek potasu</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>156671</td><td></td></tr></tbody></table>

synteza jednoputowa z wykorzystaniem mikrofal n-succinimidylo-4-[18f]fluorobenzoesanu ([18f]sfb)

Microwave-assisted One-pot Synthesis of N-succinimidyl-4-[18F]fluorobenzoate ([18F]SFB)

Biocząsteczki, w tym peptydy,1-9 białka,10,11 przeciwciała oraz ich zmodyfikowane fragmenty,12-14 zyskują na znaczeniu zarówno jako potencjalne leki, jak i środki do obrazowania molekularnego. W szczególności, po znakowaniu radioizotopami emitującymi pozytony (np. Cu-64, Ga-68 lub F-18), mogą one służyć jako sondy do celowanego obrazowania wielu procesów fizjologicznych i patologicznych.15-18 W związku z tym znacznym wysiłkom poświęcono syntezę i badanie biocząsteczek znakowanych 18F. Choć istnieją eleganckie przykłady bezpośredniego znakowania peptydów 18F,19-22 surowe warunki reakcji (tj. rozpuszczalniki organiczne, ekstremalne pH, wysoka temperatura) towarzyszące bezpośredniej radiofluorynacji są zazwyczaj niekompatybilne z delikatnymi próbkami białek. Do dziś zatem włączanie radioznakowanych grup protetycznych do biocząsteczek pozostaje metodą z wyboru.23,24
N-Succynimidylo-4-[18F]fluorobenzoesan ([18F]SFB),25-37 odczyn typu Boltona-Huntera reagujący z grupami aminowymi biomolekuł, jest bardzo wszechstronną grupą protetyczną do znakowania 18F szerokiego spektrum obiektów biologicznych, ze względu na jego ewidentną stabilność in vivo oraz wysoką wydajność radioznakowania. Po znakowaniu [18F]SFB otrzymane [18F]fluorobenzoilowane biomolekuły mogą być badane jako potencjalne znaczniki PET w badaniach obrazowania in vivo.1 Większość opisanych w literaturze radiosyntez [18F]SFB wymaga dwóch lub nawet trzech reaktorów i wielokrotnych oczyszczania z wykorzystaniem ekstrakcji do fazy stałej (SPE) lub wysokosprawnej chromatografii cieczowej (HPLC). Tak długotrwałe procesy utrudniają rutynową produkcję i powszechne zastosowanie w radioznakowaniu biomolekuł. Choć zgłoszono kilka syntez [18F]SFB wspomaganych modułowo,29-32, 41-42 opierają się one głównie na skomplikowanych i czasochłonnych procedurach z wykorzystaniem kosztownych, dostępnych komercyjnie automatów do radiochemii (Tabela 1). Dlatego dalsze uproszczenie radiosyntezy [18F]SFB przy użyciu taniego zestawu byłoby bardzo korzystne dla jej adaptacji do procesu zautomatyzowanego.
W niniejszej pracy przedstawiamy zwięzłą metodę otrzymywania [18F]SFB, opartą na uproszczonej syntezie jednoparnej wspomaganej mikrofalowo (Rysunek 1). Nasze podejście nie wymaga oczyszczania między poszczególnymi etapami ani stosowania odczynników wodnych. Ponadto naświetlanie mikrofalowe, wykorzystywane w syntezach kilku znaczników PET,38-41 może zapewniać wyższe RCY i lepszą selektywność niż odpowiadające im reakcje termiczne lub zapewniać podobne wydajności w krótszym czasie reakcji.38 Co najważniejsze, podczas znakowania biomolekuł zaoszczędzony czas można przeznaczyć na późniejszy etap biokoniugacji lub obrazowania PET.28,43 Nowatorstwo naszej ulepszonej syntezy [18F]SFB jest dwukrotne: (1) bezwodna strategia deprotekcji nie wymaga oczyszczania produktów pośrednich między poszczególnymi etapami oraz (2) radiochemiczne przekształcenia wspomagane mikrofalowo umożliwiają szybką i niezawodną produkcję [18F]SFB.

Opracowano prostą, jednoetapową syntezę N-sukcynimidylo-4-[18F]fluorobenzoesanu ([18F]SFB) w oparciu o beznawodny, trzyetapowy proces radiochemiczny. Dzięki zastosowaniu ogrzewania mikrofalowego całą procedurę można przeprowadzić w czasie krótszym niż 30 min, lub w 60 min w przypadku dodatkowego oczyszczania za pomocą preparatywnej HPLC. Skorygowane o czas rozpadu wydajności radiochemiczne (RCYs) wynosiły 35-5% (n > 30).

Synteza jednoputowa z wykorzystaniem mikrofal N-succinimidylo-4-[18F]fluorobenzoesanu ([18F]SFB)

Biocząsteczki, w tym peptydy,1-9 białka,10,11 przeciwciała oraz ich inżynieryjne fragmenty,12-14 zyskują na znaczeniu zarówno jako potencjalne ...

Niniejsza procedura zaprezentuje nowatorską jednopotową syntezę F 18 SFB wspomaganą mikrofalowo, opartą na trzyetapowym procesie radiochemicznym z etapem bezwodnej ochrony grupy D. Proces rozpoczyna się od radiofluorowania benzoesanu etylu 4-NNN-trimetyloamoniowego tryfllanu przy ogrzewaniu mikrofalowym w obecności suszonego fluorku i DMSO w celu otrzymania 4-F 18 fluorobenzoesanu etylu. W kolejnym kroku dodanie roztworu tert-tlenku potasu w DMSO, a następnie naświetlanie mikrofalowe, zapewnia pełną bezwodną ochronę grupy D i prowadzi do otrzymania 4-F 18 fluorobenzoesanu potasu.Ostateczna konwersja do surowego F 18 SFB jest przeprowadzana z wykorzystaniem aktywacji TSTU. TSTU w acetonitrylu jest dodawane do mieszaniny reakcyjnej zawierającej cztery soli F 18 fluobenzoianu, a następnie całość jest podgrzewana. Ostatnim etapem procedury jest oczyszczanie surowego F 18 SFP za pomocą ekstrakcji do fazy stałej oraz wysokosprawnej chromatografii cieczowej.Ostatecznie uzyskano wyniki wykazujące, że nowatorska, uproszczona i szybka synteza F 18 SFB w jednym naczyniu może zostać przeprowadzona dzięki bezwodnej ochronie D oraz ogrzewaniu mikrofalowemu. Indywidualne podejście do syntezy SFB było dla mnie wyzwaniem, ponieważ wymagało ono skomplikowanego zestawu reakcyjnego oraz licznych etapów oczyszczania i suszenia ze względu na zastosowanie roztworu EQU przez mojego postdoka dr.Prezentujemy procedurę działania. Przed rozpoczęciem niniejszego protokołu należy przygotować aparatystykę do jednoczyczynnikowej syntezy F 18 SFP wspomaganej mikrofalowo, zgodnie z opisem w protokole pisemnym. Po przygotowaniu aparatury należy uruchomić układ HPLC w celu kondycjonowania kolumny HPLC.Rozcieńczyć roztwór fluorku F 18 w wodzie oh 18 przy użyciu mieszaniny crypto fix 2 22, 1 molarnego wodnego węglanu potasu oraz acetonitrylu, a następnie przenieść do RV one. Po ochłodzeniu uruchomić sekwencję suszenia w programie sterowania mikrofalą, aby usunąć resztkową wodę z RV one. Gdy temperatura układu spadnie poniżej 50 °C, dodać do reaktora dodatkowy 1 ml acetonitrylu i powtórzyć sekwencję jeszcze raz w celu syntezy Ethel four 18 F FLUA benzoate.Najpierw należy dodać do RV one przez linię wlotową dwa roztwór A-D-M-S-O zawierający Ethel four NNN trimethyl ammonium benzoate tri. Następnie należy wykonać sekwencję znakowania w programie sterowania mikrofalowego przy chłodzeniu naczynia z mieszadłem i zamkniętych wszystkich zaworach. W kolejnym kroku należy zsyntetyzować potassium for F 18 fluoro benzoate, dodając 0.5 milliliters roztworu DMSO zawierającego potassium turt oxide do RV one przez linię wlotową trzy.Uruchom program ochrony D w ramach programu sterowania mikrofalowego przy włączonym chłodzeniu naczynia z mieszadłem i wszystkich zamkniętych zaworach. Następnie przeprowadź syntezę surowego F 18 SFB, dodając roztwór acetonitrylu zawierający TSTU do RV one poprzez linię wlotową Line six. Wykonaj sekwencję sprzęgania w ramach programu sterowania mikrofalowego przy włączonym chłodzeniu naczynia z mieszadłem i wszystkich zamkniętych zaworach, aby otrzymać surowy produkt F 18 SFB.Rozpocznij przygotowanie oczyszczonego metodą SPE F 18 SFB, dodając jeden mililitr 5% wodnego kwasu octowego do RV one przez linię wlotową siedem w celu zneutralizowania mieszaniny reakcyjnej. Następnie przenieś roztwór do fiolki B zawierającej osiem mililitrów 5% wodnego kwasu octowego. Przepuść rozcieńczoną mieszaninę reakcyjną przez kartridż SPE, aby uwięzić surowe F 18 SFP, używając azotu pod ciśnieniem 10 pounds per square inch.Po przejściu przez wkład, przemyj go mieszaniną acetonitrylu i wody z rezerwuaru A, elując F 18 SFB do RV dwa. Używając 2 mL acetonitrylu z rezerwuaru C, rozcieńcz oczyszczony metodą SPE F 18 SFB za pomocą 2 mL wody w RV dwa, a następnie przenieś mieszaninę do 5 mL pętli HPLC.Wstrzyknij roztwór do radio-HPLC. Frakcja zawierająca oczyszczony F 18 SFB powinna pojawić się w czasie retencji wynoszącym około 8 do 10 minut. Zbierz próbkę do fiolki D, która jest uprzednio napełniona 10 mililitrami wody.Kluczowe jest, aby objętość zebranej tutaj frakcji wynosiła od czterech do pięciu mililitrów. Przepuść rozcieńczoną mieszaninę reakcyjną z fiolki D przez drugi kartridż SPE, aby zatrzymać oczyszczony F 18 SFB, używając azotu pod ciśnieniem 10 pounds per square inch. Po przepuszczeniu mieszaniny osusz kartridż strumieniem azotu przez dwie do trzech minut.Wymyć oczyszczony F 18 SFB do naczynia RV trzy, używając 3 mL eteru z rezerwuaru E. Na koniec odparować rozpuszczalnik w naczyniu RV trzy do suchości, kierując łagodny strumień azotu, korzystając z kąpieli wodnej rozgrzanej do 40 °C. Otrzymany suchy F 18 SFB można zrekonstytuować w buforze PBS do dalszych zastosowań.Tożsamość końcowego produktu F 18 SFB potwierdzono poprzez porównanie czasu retencji w metodzie HPLC z nierytraktywnym wzorcem SFB. Oczyszczony F 18 SFB poddano również analizie za pomocą radio-TLC oraz HPLC w celu określenia jego czystości radiochemicznej i chemicznej. Wydajność radiochemiczna F 18 SFP wyniosła 35 ± 5% w ciągu 60 minut po oczyszczaniu metodą HPLC, przy wysokiej czystości radiochemicznej i dobrej czystości chemicznej.Aktywność właściwa wynosiła od 1.8 do 9 Ci/µmol, w zależności od początkowej radioaktywności. Należy pamiętać, że praca z promieniowaniem i materiałami promieniotwórczymi może być niezwykle niebezpieczna, dlatego podczas wykonywania tej procedury należy przez cały czas stosować środki ostrożności, takie jak osłony, osobiste dozymetry oraz instrumenty sterowane zdalnie.

microwave-assisted-one-pot-synthesis-n-succinimidyl-4

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Mikrofalowa synteza w jednym naczynku N-sukcynimidylo-4-[18F]fluorobenzoesanu ([18F]SFB)

Demonstrujemy półautomatyczną syntezę radiochemiczną [18F]3F4AP i procedury kontroli jakości.

Zautomatyzowana synteza radiochemiczna [18F]3F4AP: nowy znacznik PET do obrazowania chorób demielinizacyjnych

Synteza na dużą skalę wysoce wydajnych termicznie aktywowanych emiterów opóźnionej fluorescencji jest opisana w prezentowanym artykule.

Zwiększenie skali syntezy chemicznej aktywowanych termicznie emiterów opóźnionej fluorescencji na bazie rdzenia dibenzotiofenu-S,dwutlenku S

Opisujemy protokół przedklinicznego śledzenia in vivo przerzutów nowotworowych. Opiera się on na reporterze radionuklidowo-fluorescencyjnym łączącym symporter jodku sodu, wykrywany przez nieinwazyjny [18F]tetrafluoroboran-PET, oraz białko fluorescencyjne w celu usprawnionego potwierdzenia ex vivo. Metoda ma zastosowanie do przedklinicznego śledzenia komórek in vivo poza biologią guza.

Obrazowanie genu reporterowego radionuklidowo-fluorescencyjnego w celu śledzenia progresji guza w modelach guzów gryzoni

Miejsca obrazowania pozytonowej tomografii emisyjnej (PET), które biorą udział w wielu wczesnych badaniach klinicznych, wymagają solidnych i wszechstronnych możliwości produkcji radioznaczników. Na przykładzie radioznacznika [18F] Klofarabiny ilustrujemy, jak zautomatyzować syntezę radioznacznika za pomocą elastycznego radiosyntezatora opartego na kasecie i zwalidować syntezę do użytku klinicznego.

Automatyzacja protokołu syntezy radioznacznika metodą pozytonowej tomografii emisyjnej (PET) do produkcji klinicznej

Ten protokół pokazuje, jak używać oprogramowania Auto-CHO do hierarchicznej i programowalnej jednogarnkowej syntezy oligosacharydów. Opisano w nim również ogólną procedurę eksperymentów z oznaczaniem RRV i jednogarnkową glikozylacją SSEA-4.

Hierarchiczna i programowalna jednoetapowa synteza oligosacharydów

Synteza radiofarmaceutyków znakowanych fluorem-18 (18F) do pozytonowej tomografii emisyjnej zazwyczaj wymaga miesięcy doświadczenia. Po włączeniu do radioznacznika, motyw akceptora krzemowo-fluorkowego (SiFA) umożliwia prosty protokół znakowania 18F, który jest niezależny od kosztownego sprzętu i szkolenia przygotowawczego, przy jednoczesnym zmniejszeniu ilości potrzebnego prekursora i wykorzystaniu łagodniejszych warunków reakcji.

Rozdział 18Znakowanie F radioznaczników funkcjonalizowanych akceptorem fluorku krzemu (SiFA) do pozytonowej tomografii emisyjnej

Ta metoda opisuje użycie nowatorskiej metodologii wysokoprzepustowej, opartej na reakcjach chemicznych kropelk, do szybkiej i ekonomicznej optymalizacji radiofarmaceutyków przy użyciu nanomolowych ilości odczynników.

Optymalizacja reakcji radiochemicznych z wykorzystaniem matryc kropelkowych

Tutaj opisujemy radiosyntezę 1-(2-[18F]Fluoroetylo)-L-tryptofanu, środka do obrazowania metodą pozytonowej tomografii emisyjnej do badania metabolizmu tryptofanu, przy użyciu jednogarnkowej, dwuetapowej strategii w systemie syntezy radiochemicznej o dobrych wydajnościach radiochemicznych, wysokim nadmiarze enancjomerycznym i wysokiej niezawodności.

Radiosynteza 1-(2-[18F]fluoroetylo)-L-tryptofanu przy użyciu jednogarnkowego, dwuetapowego protokołu

Prezentowano prosty, niedrogi i nowatorski aparat do syntezy peptydów w fazie stałej w komercyjnym reaktorze mikrofalowym.

Niedroga adaptacja komercyjnego reaktora mikrofalowego do syntezy peptydów fazy stałej

Protokół ten opisuje metodę produkcji i oceny aktywności przeciwdrobnoustrojowej oraz cytotoksyczności peptydu kationowego Mel4 oraz naśladowcy peptydu RK758. Integrując syntezę chemiczną, ekspresję rekombinowaną oraz standaryzowane testy funkcjonalne, zapewnia usprawniony proces produkcji i testowania peptydów oraz naśladowców małych cząsteczek.

Produkcja i testowanie peptydów przeciwdrobnoustrojowych oraz ich naśladowców

Poznaj uproszczoną jednogarnkową syntezę [18F]SFB wspomaganą mikrofalami do znakowania biomolekuł w obrazowaniu PET. Ta metoda eliminuje etapy oczyszczania pośredniego, zapewniając wysoką wydajność radiochemiczną i czystość produktu.

Synteza jednoputowa z wykorzystaniem mikrofal N-succinimidylo-4-[¹⁸F]fluorobenzoesanu ([¹⁸F]SFB)

Przeglądaj więcej filmów