Name: Solidna generacja komórek podobnych do hepatocytów z ludzkich embrionalnych populacji komórek macierzystych (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-10-26T12:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 49 s
Description: Poznaj metodę generowania hepatocytów z ludzkich embrionalnych komórek macierzystych z wydajnością około 90%. Technika ta umożliwia badanie funkcji wątroby in vitro i dostarcza nieograniczone zasoby komórek do badań nad toksycznością leków.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dr Hay był wspierany przez stypendium RCUK, dr West był wspierany przez Departament Chirurgii, dr Medine był wspierany przez grant z BHF Core Fund, Pan Baltasar Lucendo-Villarin był wspierany przez studia doktoranckie MRC. Dr Zhou otrzymał stypendium od rządu chińskiego.

<ol><li>Asgari, S., Pournasr, B., Salekdeh, G. H., Ghodsizadeh, A., Ott, M., Baharvand, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induced+pluripotent+stem+cells%3A+a+new+era+for+hepatology%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Induced pluripotent stem cells: a new era for hepatology.</a> J. Hepatol. 53, 738-751 (2010).</li>
<li>Hay, D. C., Pernagallo, S., Diaz-Mochon, J. J., Medine, C. N., Greenhough, S., Hannoun, Z., Schrader, J., Black, J. R., Fletcher, J., Dalgetty, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unbiased+Screening+of+Polymer+Libraries+to+Define+Novel+Substrates+for+Functional+Hepatocytes+with+Inducible+Drug+Metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research%22%5BJournal%5D)">Unbiased Screening of Polymer Libraries to Define Novel Substrates for Functional Hepatocytes with Inducible Drug Metabolism.</a> Stem Cell Research. 6, 92-101 (2011).</li>
<li>Payne, C. M., Samuel, K., Pryde, A., King, J., Brownstein, D., Schrader, J., Medine, C. N., Forbes, S. J., Iredale, J. P., Newsome, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistence+of+Functional+Hepatocyte+Like+Cells+in+Immune+Compromised+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+International%22%5BJournal%5D)">Persistence of Functional Hepatocyte Like Cells in Immune Compromised Mice.</a> Liver International. 31, 254-262 (2011).</li>
<li>Greenhough, S., Medine, C., Hay, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pluripotent+Stem+Cell+Derived+Hepatocyte+Like+Cells+and+their+Potential+in+Toxicity+Screening%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology%22%5BJournal%5D)">Pluripotent Stem Cell Derived Hepatocyte Like Cells and their Potential in Toxicity Screening.</a> Toxicology. 278, 250-255 (2010).</li>
<li>Medine, C. N., Greenhough, S., Hay, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Role+of+Stem+Cell+Derived+Hepatic+Endoderm+in+Human+Drug+Discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+Society+Transactions%22%5BJournal%5D)">The Role of Stem Cell Derived Hepatic Endoderm in Human Drug Discovery.</a> Biochemical Society Transactions. 38, 1033-1036 (2010).</li>
<li>Hannoun, Z., Fletcher, J., Greenhough, S., Medine, C. N., Samuel, K., Sharma, R., Pryde, A., Black, J. R., Ross, J. A., Wilmut, I., Iredale, J. P., Hay, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Comparison+between+Conditioned+Media+and+Serum+Free+Media+in+Human+Embryonic+Stem+Cell+Culture+and+Differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+Reprogramming%22%5BJournal%5D)">The Comparison between Conditioned Media and Serum Free Media in Human Embryonic Stem Cell Culture and Differentiation.</a> Cellular Reprogramming. 12, 133-140 (2010).</li>
<li>Dalgetty, D. M., Medine, C., Iredale, J. P., Hay, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progress+and+Future+Challenges+in+Stem+Cell-Derived+Liver+Technologies%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology+-+Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">Progress and Future Challenges in Stem Cell-Derived Liver Technologies.</a> American Journal of Physiology - Gastrointestinal and Liver Physiology. 297, 241-248 (2009).</li>
<li>Hay, D. C., Fletcher, J., Payne, C., Terrace, J. D., Gallagher, R. C. J., Snoeys, J., Black, J., Wojtacha, D., Samuel, K., Hannoun, Z., Pryde, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+Efficient+Differentiation+of+hESCs+to+Functional+Hepatic+Endoderm+Requires+ActivinA+and+Wnt3a+Signalling%5BTitle%5D)+AND+%22+Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Highly Efficient Differentiation of hESCs to Functional Hepatic Endoderm Requires ActivinA and Wnt3a Signalling.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 105, 12301-12306 (2008).</li>
<li>Fletcher, J., Cui, W., Samuels, K., Black, J. R., Currie, I. S., Terrace, J. D., Payne, C., Filippi, C., Newsome, P., Forbes, S. J., Ross, J. A., Iredale, J. P., Hay, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Inhibitory+Role+of+Stromal+Cell+Mesenchyme+on+Human+Embryonic+Stem+Cell+Hepatocyte+Differentiation+is+Overcome+by+Wnt3a+Treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Cloning+and+Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">The Inhibitory Role of Stromal Cell Mesenchyme on Human Embryonic Stem Cell Hepatocyte Differentiation is Overcome by Wnt3a Treatment.</a> Cloning and Stem Cells. 10, 331-340 (2008).</li>
</ol>

Nie stwierdzono konfliktu interesów.

Opracowaliśmy prosty, jednorodny i wysoce odtwarzalny model in vitro , aby wygenerować skalowalne poziomy ludzkich HLC. Nasz model został zweryfikowany przez szereg współpracujących z nami zewnętrznych laboratoriów. Rutynowo charakteryzujemy HLC pochodzące z komórek macierzystych, korzystając z naszego wewnętrznego zestawu narzędzi markerów rozwojowych i testów funkcjonalnych specyficznych dla wątroby (z których większość jest dostępna na rynku). Krytycznymi etapami naszego procesu są: utrzymanie pluripotencji k...

<table><tbody><tr><td colspan="4">Płytki i kolby powlekające Matrigel <ol><li> Matrigel (10 mL, BD Biosciences, Wielka Brytania); przechowywać w temperaturze -20&#x00B0;C.</li><li>KO-DMEM (500 mL, Gibco, Invitrogen, Wielka Brytania); przechowywać w 4&#x00B0;C.</li><li>Płytki do hodowli tkankowych (6 dołków, 12 well, Corning, Wielka Brytania) </li><li>Kolba do hodowli tkankowych (25 cm2 wentylowana, Corning, Wielka Brytania)</li></ol>hESC Maintenance <ol><li>Mysza pożywka kondycjonowana fibroblastami embrionalnymi (MEF-CM) (100 mL, R & D Systems, Stany Zjednoczone); przechowywać w temperaturze -20&#x00B0;C.</li><li>BSA roztwór (50 ml, Sigma Aldrich, Wielka Brytania); przechowywać w temperaturze 4&#x00B0;C.</li><li>Ludzki podstawowy czynnik wzrostu fibroblastów (100 &#x03BC; g, Peprotech, Stany Zjednoczone); przechowywać w temperaturze -20&#x00B0;C.</li></ol>Pasażowanie hESC za pomocą kolagenazy<ol><li>Studzienka zlewająca lub kolba hESCs.</li><li>Studzienki lub kolby pokryte Matrigelem, w zależności od potrzeb.</li><li>Sól fizjologiczna buforowana fosforanem (-MgCl2, -CaCl2) (500 ml, Gibco, Invitrogen, Wielka Brytania); przechowywać w temperaturze pokojowej.</li><li>Collagenase IV (1 g, Gibco, Invitrogen, Wielka Brytania); przechowywać w 4&#x00B0;C.</li><li>Mysza pożywka kondycjonowana fibroblastami embrionalnymi (MEF-CM) (100 mL, R & D Systems, Stany Zjednoczone).</li><li>Ludzki zasadowy czynnik wzrostu fibroblastów (100 &#x03BC; g, Peprotech, USA).</li></ol>Różnicowanie hESC do endodermy wątrobowej<ol><li>RPMI 1640 (500 mL, Gibco, Invitrogen, Wielka Brytania); przechowywać w 4&#x00B0;C.</li><li>B27 Suplement (10 mL, Gibco, Invitrogen, Wielka Brytania); przechowywać w temperaturze -20&#x00B0;C.</li><li>Activin A (2 &#x03BC; g, Peprotech, Stany Zjednoczone); przechowywać w temperaturze -20&#x00B0;C.</li><li>Rekombinowana mysz Wnt3a (2 &#x03BC; g, R & D Systems, Stany Zjednoczone); przechowywać w temperaturze -20&#x00B0;C.</li><li>KO-DMEM (500 mL, Gibco, Invitrogen, Wielka Brytania); przechowywać w 4&#x00B0;C.</li><li>KO-SR (500 mL, Gibco, Invitrogen, Wielka Brytania); przechowywać w temperaturze -20&#x00B0;C.</li><li>Aminokwasy endogenne (100 mL, Gibco, Invitrogen, Wielka Brytania); przechowywać pod adresem 4&#x00B0;C.</li><li>&#946;-Mercapt&#8211; tanol (10 ml, Gibco, Invitrogen, Wielka Brytania); przechowywać pod adresem 4&#x00B0;C.</li><li>DMSO (Sigma Aldrich, Wielka Brytania); przechowywać w temperaturze pokojowej</li><li>Leibovitz L-15 pożywka hodowlana (500 ml, Sigma Aldrich, Wielka Brytania); przechowywać w 4&#x00B0;C.</li><li>bulion fosforanowo-tryptozowy (100 mL, Sigma Aldrich, Wielka Brytania); przechowywać pod adresem 4&#x00B0;C.</li><li>F&#8211; tal surowica bydlęca, inaktywowana termicznie (500 mL, Gibco, Invitrogen, Wielka Brytania); przechowywać w temperaturze -20&#x00B0;C.</li><li>Hydrocortisone 21-hemisuccinate (100 mg, Sigma Aldrich, Wielka Brytania); przechowywać w temperaturze -20&#x00B0;C.</li><li>Insulin (trzustka bydlęca) (100 mg, Sigma Aldrich, Wielka Brytania); przechowywać w temperaturze -20&#x00B0;C.</li><li>L-Glutamina (100 mL, Gibco, Invitrogen, Wielka Brytania); przechowywać w temperaturze -20&#x00B0;C.</li><li>Ascorbic acid (25 g, Sigma Aldrich, Wielka Brytania); przechowywać w temperaturze -20&#x00B0;C.</li><li>Human HGF (10 &#x03BC; g, Peprotech, Stany Zjednoczone); przechowywać w temperaturze -20&#x00B0;C.</li><li>Rekombinowana ludzka onkostatyna M (OSM) (50 &#x03BC; g, R & D Systems, Stany Zjednoczone); przechowywać w temperaturze -20&#x00B0;C.</li><li>Jednostka filtrująca napędzana strzykawką 0,22 &#x03BC; m (Millipore, UK)</li></ol>Charakterystyka endodermy wątrobowej pochodzącej z hESCImmunostaining <ol><li>Sól fizjologiczna z buforu fosforanowego (-MgCl2, -CaCl2) (500 ml, Gibco, Invitrogen, Wielka Brytania); przechowywać w temperaturze pokojowej.</li><li>PBST, PBS składa się z 0,1% TWEEN 20 (Sigma-Aldrich, Wielka Brytania).</li><li>Paraformaldehyd (PFA) (Sigma-Aldrich, Wielka Brytania) składa się z PBS, przechowuj -20&#x00B0;C.</li><li>Glycerol (Sigma-Aldrich, Wielka Brytania), przechowuj w temperaturze pokojowej.</li><li>Tris Base (Sigma-Aldrich, UK), przechowywać w temperaturze pokojowej.</li><li>Ethanol</li><li>Serum (AbD Serotech, Wielka Brytania), przechowywać w temperaturze -20&#x00B0;C.</li><li>Przeciwciało wtórne, Alexa Fluorophores (Molecular Probes, Invitrogen, Wielka Brytania).</li><li>MOWIOL 4-88 (Polysciences Inc, USA) składa się z Tris HCL i glicerolu zgodnie z instrukcjami producenta. DAPI (Pierce, Thermo Fisher Scientific, Wielka Brytania) dodaje się do roztworu MOWIOL w rozcieńczeniu 1:1000.</li></ol><table border="1"> <tbody> <tr> <td colspan="2">Przeciwciała pierwotne</td> <td></td> <td></td> </tr> <tr> <td>Antygen*</td> <td> Typ</td> <td>Dostawca</td> <td>Rozcieńczenie</td> </tr> <tr> <td>ALB</td> <td>Mouse monoklonalny</td> <td>Sigma Aldrich</td> <td>1/500</td> </tr> <tr> <td>E-Cadherin</td> <td>Mouse monoklonalny</td> <td>Millipore</td> <td>1/100</td> </tr> <tr> <td>&alfa;-fetoproteina</td> <td>Mysz monoklonalna</td> <td>Sigma</td> <td>1/500</td> </tr> <tr> <td>SSEA-4 FITC</td> <td>Mysz monoklonalna</td> <td>Biolegend</td> <td>1/100</td> </tr> <tr> <td>IgG</td> <td>Mysi monoklonalny</td> <td>DAKO</td> <td>1/500</td> </tr> <tr> <td colspan="2">Przeciwciała wtórne</td> <td></td> <td></ td> </tr> <tr> <td>Przeciw mysim koniugatom FITC</td> <td>Goat Monoclonal</td> <td>Invitrogen</td> <td>1/400</td> </tr> </tbody></table>Tabela 2. Przeciwciała stosowane do immunobarwienia endodermy wątroby pochodzącej z hESC, zastosowane stężenia, gatunki, w których zostały wyhodowane i firmy, od których zostały zakupione.Analiza funkcjonalna endodermy wątrobowej i normalizacji (na białko mg)Testy cytochromu P450<ol><li>p4-GLO CYP3A4, CYP1A2, zestawy i luminometr (Promega, USA).</li><li value="1">Biała płaska płytka testowa 96 dołków z płaskim dnem (BD Biosciences, Wielka Brytania).</li><li>BCA Assay Kit (Pierce, Thermo Fisher Scientific, Wielka Brytania).</li><li>Przezroczysta 96-dołkowa płytka testowa (IWAKI, Wielka Brytania)</li></ol></td></tr></tbody></table>

solidna generacja komórek podobnych do hepatocytów z ludzkich embrionalnych populacji komórek macierzystych

Robust Generation of Hepatocyte-like Cells from Human Embryonic Stem Cell Populations

Pomimo postępu w modelowaniu toksyczności leków dla ludzi, wiele związków zawodzi podczas badań klinicznych z powodu nieprzewidzianych skutków ubocznych. Koszty badań klinicznych są znaczne, dlatego tak ważne jest, aby na wczesnym etapie opracowywania i wdrażania większej liczby predykcyjnych badań toksykologicznych (Greenhough i wsp. 2010). Ludzkie hepatocyty reprezentują obecny złoty standard oceny toksyczności leków, ale są ograniczonym zasobem, który wykazuje zmienną funkcję. W związku z tym rutynowo stosuje się unieśmiertelnione linie komórkowe i modele tkanek zwierzęcych ze względu na ich obfitość. Chociaż oba źródła mają charakter informacyjny, są one ograniczone przez słabe funkcjonowanie, zmienność gatunków i/lub niestabilność w kulturze (Dalgetty i in. 2009). Pluripotencjalne komórki macierzyste (PSC) są atrakcyjnym alternatywnym źródłem ludzkich komórek podobnych do hepatocytów (HLC) (Medine i wsp. 2010). PSC są zdolne do samoodnawiania się i różnicowania do wszystkich typów komórek somatycznych występujących u osób dorosłych, a tym samym stanowią potencjalnie niewyczerpane źródło zróżnicowanych komórek. Opracowaliśmy procedurę, która jest prosta, wysoce wydajna, podatna na automatyzację i daje funkcjonalne ludzkie HLC (Hay i in. 2008 ; Fletcher i wsp. 2008 ; Hannoun i wsp. 2010 ; Payne i wsp. 2011 oraz Hay i wsp. 2011). Wierzymy, że nasza technologia doprowadzi do skalowalnej produkcji HLC do odkrywania leków, modelowania chorób, budowy urządzeń pozaustrojowych i być może terapii transplantacyjnych opartych na komórkach.

Ten artykuł skupi się na generowaniu ludzkiej endodermy wątrobowej z populacji ludzkich embrionalnych komórek macierzystych.

Solidna generacja komórek podobnych do hepatocytów z ludzkich embrionalnych populacji komórek macierzystych

Despite progress in modelling human drug toxicity, many compounds fail during clinical trials due to unpredicted side effects. The cost of clinical ...

Ogólnym celem poniższego eksperymentu jest wytworzenie jednorodnych poziomów ludzkich hepatocytów w celu zbadania biologii ludzkiej wątroby in vitro. Jest to inicjowane przez doprowadzenie ludzkich embrionalnych komórek macierzystych lub ludzkich ESC do ostatecznej endodermy za pomocą bodźców fizjologicznych aktywnych w A i WINT trzy A.As drugim krokiem ostateczna endoderma jest bardzo skutecznie kierowana do endodermy wątrobowej. Następnie ludzka endoderma wątrobowa pochodząca z ESC jest dojrzewana in vitro w celu wytworzenia funkcjonalnych ludzkich hepatocytów.Wyniki PCR Western blot, immunofluorescencji, metabolizmu Elizy i leków wskazują, że metoda ta wyprowadza hepatocyty z ludzkich ESC z wydajnością około 90%Dzięki tej technice możemy teoretycznie wygenerować niewyczerpane zapasy pierwotnych ludzkich hepatocytów, które wykazują znaczny poziom funkcji ludzkiej wątroby. W przyszłości przyniesie to korzyści w dokładnym przewidywaniu toksyczności leków i zapewni wsparcie dla ludzkiej wątroby. Sztuczka polega na tym, aby napędzać różnicowanie słoneczne i gęstość rdzenia ludzkich komórek.Wizualna demonstracja tej metody ma kluczowe znaczenie, ponieważ gęstość komórek rdzenia jest niezbędna do wygenerowania jednorodnej populacji komórek. Przeszkoliliśmy ponad 15 osób w czterech lokalizacjach na całym świecie, aby skutecznie stosować tę technikę. Rozpocznij od hodowli ludzkich embrionalnych komórek macierzystych i rozmnażaj je na płytkach pokrytych matryżelem z mysimi fibroblastami embrionalnymi kondycjonowanymi pożywką ORM cm uzupełnioną zasadowym FGF.Ważne jest, aby dokładnie scharakteryzować ludzkie komórki macierzyste zachowane przed różnicowaniem wątroby. Na przykład komórki te wykazują ludzką morfologię ESC. Wykazują również ekspresję markerów pluripotencjalnych komórek macierzystych, OCT four i nano w poziomach porównywalnych z ludzką linią ESC kontroli pozytywnej H seven.Dodatkowo, ludzkie ESC są dodatnie dla SS EEA cztery. Gdy ludzkie ESC E osiągną płynność od 30 do 60%, zastąp ME CM świeżo przygotowanym podłożem różnicującym. Aby zainicjować różnicowanie wątrobowe, pożywkę należy wymieniać co 24 godziny przez trzy dni.Po trzech dniach komórki przybierają trójkątny wygląd, gdy zaczynają różnicować się w kierunku fenotypu endodermalnego. Przełącz medium na różnicowanie SR DMSO. Pożywka kultura przez cztery do pięciu dni.Wymiana pożywki co 48 godzin. Po tym pięciodniowym okresie komórki zaczęłyby przybierać wielokątny wygląd charakterystyczny dla komórek wątroby. Różnicowanie ludzkiego ESC do endodermy wątrobowej znajduje odzwierciedlenie w serii głębokich zmian morfologicznych do dziewiątego dnia.Co więcej, ekspresja Octa four w ciągu dziewięciodniowego kursu czasu stopniowo maleje. W przeciwieństwie do tego, transkrypcje wątrobowe FP i albuminy zwiększają się od siódmego dnia. Kontynuuj, dojrzewając komórki i utrzymując fenotyp wątroby w końcowej pożywce przez dziewięć dni ze świeżą pożywką co 48 godzin.Na koniec monitoruj hodowane komórki za pomocą mikroskopii kontrastu fazowego pod kątem stopniowych zmian morfologicznych od kolczastego trójkątnego kształtu do charakterystycznej morfologii wątroby wykazującej wielokątny wygląd, aby ilościowo ocenić test funkcji endodermy wątroby. Dla cytochromu P cztery 50 aktywność enzymatyczna, w szczególności SIP trzy A cztery lub SIP jeden A dwa. Pierwszy dzień inkubacji 17.Ludzkie komórki endodermy wątroby pochodzące z ESC ze specyficznym substratem przeprowadzające reakcje w trzech powtórzeniach. Pamiętaj, aby użyć pożywki do hodowli tkankowej jako inkubacji kontroli ujemnej w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez pięć godzin. Zebrać supernatanty i zmierzyć względne poziomy podstawowej aktywności enzymatycznej zgodnie z instrukcjami producenta.Teraz dla każdej próbki oblicz aktywność enzymatyczną na miligram białka określoną przez A-B-C-A-S. Barwienie immunologiczne typowych kultur otrzymanych tą metodą dojrzewania in vitro endodermy wątroby. Wykazać jednorodną ekspresję trzech markerów wątroby ludzkiej, albuminy FP i ein.Po obejrzeniu tego filmu powinieneś dobrze zrozumieć, jak skutecznie różnicować ludzkie i uczyć się komórek macierzystych do hepatocytów. Po opanowaniu tej techniki można ją wykonywać codziennie z zaangażowaniem około dwóch i pół minuty na milion komórek. Bardzo ważne jest, aby w procesie różnicowania codziennie sprawdzać zmiany morfologiczne.

robust-generation-hepatocyte-like-cells-from-human-embryonic-stem

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Ten artykuł skupi się na rozwijaniu powierzchni pokrytych polimerem do długotrwałej, stabilnej hodowli ludzkich hepatocytów pochodzących z komórek macierzystych.

Stabilizacja fenotypu wątrobowokomórkowego przy użyciu zoptymalizowanych powierzchni syntetycznych

Przedstawiona tutaj metoda opisuje skalowalny i gotowy do stosowania w dobrej praktyce produkcyjnej (GMP) system różnicowania do generowania ludzkich komórek hepatocytowych z pluripotencjalnych komórek macierzystych. Służy jako opłacalny i ustandaryzowany system do generowania ludzkich komórek podobnych do hepatocytów do podstawowych i stosowanych badań nad ludzką wątrobą.

Zdefiniowane i skalowalne generowanie komórek podobnych do hepatocytów z ludzkich pluripotencjalnych komórek macierzystych

Przedstawiony tutaj protokół opisuje platformę do identyfikacji małych cząsteczek w leczeniu chorób wątroby. Przedstawiono szczegółowy opis szczegółowy różnicowania iPSC w komórki o charakterystyce hepatocytów na płytkach 96-dołkowych oraz wykorzystania komórek do badań przesiewowych w poszukiwaniu małych cząsteczek o potencjalnej aktywności terapeutycznej.

Wykorzystanie ludzkich indukowanych pluripotencjalnych komórek hepatocytów pochodzących z komórek macierzystych do odkrywania leków

Ten protokół opisuje półautomatyczne podejście do produkcji komórek podobnych do hepatocytów z ludzkich pluripotencjalnych komórek macierzystych w formacie płytki 96-dołkowej. Proces ten jest szybki i opłacalny, co pozwala na produkcję partii komórek podobnych do hepatocytów o gwarantowanej jakości do podstawowych i stosowanych badań na ludziach.

Półautomatyczna produkcja komórek podobnych do hepatocytów z pluripotencjalnych komórek macierzystych

Ten protokół opisuje monowarstwową, pozbawioną surowicy metodę efektywnego generowania komórek podobnych do hepatocytów z ludzkich pluripotencjalnych komórek macierzystych (hPSC) w ciągu 18 dni. Obejmuje to sześć etapów, w których hPSC sekwencyjnie różnicują się w pośrednie typy komórek, takie jak prymitywna smuga, ostateczna endoderma, tylne jelito przednie i progenitorzy zawiązków wątroby, zanim utworzą komórki podobne do hepatocytów.

Skuteczne różnicowanie ludzkich pluripotencjalnych komórek macierzystych w komórki wątroby

Ten protokół opisuje podejście do produkcji hepatosfer z ludzkich pluripotencjalnych komórek macierzystych przy użyciu zdefiniowanego systemu hodowli i samoorganizacji komórek. Protokół ten jest powtarzalny w wielu liniach komórkowych, jest opłacalny i pozwala na produkcję stabilnych ludzkich hepatosfer do zastosowań biomedycznych.

Produkcja trójwymiarowych ludzkich hepatosfer bez surowicy z pluripotencjalnych komórek macierzystych

Celem tego artykułu jest dostarczenie ustandaryzowanego podejścia do indukowania różnicowania ludzkich komórek progenitorowych wątroby od pluripotencjalnych komórek macierzystych. Opracowanie tej procedury z gotowymi do użycia preparatami pożywek oferuje użytkownikowi łatwy system do generowania ludzkich komórek wątroby do badań biomedycznych i translacji.

Specyfikacja progenitorów wątroby z pluripotencjalnych komórek macierzystych przy użyciu zdefiniowanego systemu różnicowania

Ten manuskrypt opisuje szczegółowy protokół różnicowania ludzkich embrionalnych komórek macierzystych (hESC) w funkcjonalne komórki podobne do hepatocytów (HLC) poprzez ciągłe uzupełnianie Activiny A i CHIR99021 podczas różnicowania hESC do ostatecznej endodermy (DE).

Skuteczna metoda ukierunkowanej indukcji komórek podobnych do hepatocytów z ludzkich embrionalnych komórek macierzystych

Tutaj prezentujemy niegenetyczną metodę generowania ludzkich autologicznych sferoid wątroby przy użyciu komórek jednojądrzastych wyizolowanych z krwi obwodowej w stanie ustalonym.

Sferoidy ludzkiej wątroby z krwi obwodowej w badaniach nad chorobami wątroby

Protokół ten opisuje wytwarzanie szybkich i powtarzalnych endodermalnych organoidów wątrobowych (eHEPO). Dzięki temu protokołowi eHEPO mogą być produkowane w ciągu 2 tygodni i rozwijać się w dłuższej perspektywie (ponad 1 rok) bez utraty swojego zróżnicowania i funkcjonalności.

Wytwarzanie funkcjonalnych endodermalnych organoidów wątroby

Dostępne systemy różnicowania komórek macierzystych pluripotencjalnych (PSC) do funkcjonalnych komórek są obecnie utrudnione przez problemy związane z poważną zmiennością między liniami i między partiami. Tutaj, używając różnicowania serca jako głównego przykładu, przedstawiamy protokół inteligentnego monitorowania i modulowania procesu różnicowania PSC w oparciu o uczenie maszynowe oparte na obrazie.

Strategia uczenia maszynowego oparta na obrazie żywych komórek do monitorowania różnicowania pluripotencjalnych komórek macierzystych

Poznaj metodę generowania hepatocytów z ludzkich embrionalnych komórek macierzystych z wydajnością około 90%. Technika ta umożliwia badanie funkcji wątroby in vitro i dostarcza nieograniczone zasoby komórek do badań nad toksycznością leków.

Solidna generacja komórek podobnych do hepatocytów z ludzkich embrionalnych populacji komórek macierzystych

Przeglądaj więcej filmów