JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Biologia
0 wyświetleń • 3:50 min. • April 30th, 2023
Na początek należy podać zastrzyk z roztworu skopolaminy i terbutaliny, aby zminimalizować obwodowe skutki uboczne pilokarpiny. Następnie należy podać wstrzyknięcie roztworu pilokarpiny w celu wywołania stanu padaczkowego lub SE. Pilokarpina zmieni pobudliwość neuronalną mózgu.
Natychmiast po tym umieść mysz w ciepłym inkubatorze i monitoruj do indukcji SE. Szukaj głową i rytmicznych ruchów przednich nóg lub jakiegokolwiek zachowania w stadium 3 lub wyższym w skali Racine'a. Następnie umieść mysz w inkubatorze o temperaturze pokojowej i kontynuuj monitorowanie zachowania zwierzęcia.
Następnie podaj zastrzyk z roztworu diazepamu, aby zakończyć SE. Na koniec podaj zastrzyk z roztworu dekstrozy, aby pomóc zwierzęciu w powrocie do zdrowia. Po indukcji SE zwierzę wchodzi w okres utajenia wolny od napadów do momentu wystąpienia spontanicznych nawracających napadów.
Zacznij od zważenia każdego 8-tygodniowego samca myszy. Przygotować 2 miligramy na kilogram skopolaminy i terbutaliny, a także 280 miligramów na kilogram roztworu pilokarpiny. Następnie wstrzyknij roztwór dootrzewnowo każdej myszy i wróć myszy do klatek.
Po 30 minutach od podania skopolaminy i terbutaliny należy wstrzyknąć roztwór pilokarpiny każdej myszy. Natychmiast po wstrzyknięciu pilokarpiny umieść myszy w inkubatorze o temperaturze od 28 do 30 stopni Celsjusza w celu obserwacji. Następnie monitoruj zachowanie myszy, aż do momentu wywołania stanu padaczkowego lub SE. Jeśli zostaną wykryte napady limbiczne, które odpowiadają etapowi 3 lub wyższemu według skali Racine'a, zapisz czas i monitoruj myszy.
Gdy ciągłe napady motoryczne trwają dłużej niż 2 minuty, umieść mysz w nowej klatce w temperaturze pokojowej i monitoruj przez 3 godziny, aby ustalić, czy ich napady konwulsyjne trwają nadal i czy wywołane jest SE. Następnie zakończ ostre napady behawioralne po 3 godzinach od wystąpienia SE, wstrzykując 10 miligramów na kilogram roztworu diazepamu. Po wstrzyknięciu diazepamu podaj 1 mililitr 5% dekstrozy na pojedynczą mysz, aby pomóc w powrocie do zdrowia.
W 1 dniu po indukcji SE zważ myszy i trzymaj je w inkubatorze przez jeden dodatkowy dzień. W 2 dniu po indukcji SE zważ myszy i umieść je z powrotem w klatce domowej. Zapewnij wilgotne jedzenie, aby ułatwić regenerację. Na koniec zmierz dzienną masę ciała zwierząt do 7 dni po pilokarpinie, a jeśli masa ciała nie wzrosła, wstrzyknij myszom 5% dekstrozy.