Przygotowanie organoidów z guzów: model guza 3D in vitro
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 3:17 min. • April 30th, 2023
Zmiel tkankę nowotworową na małe kawałki. Przenieś kawałki do probówki z buforem do wytrawiania. Włókna kolagenowe otaczające komórki ulegają rozpadowi, degradując macierz tkanki. Następnie rozdrobnić strawione kawałki i wyrzucić większość buforu do wytrawiania. Przesuń rurkę, aby rozbić granulkę.
Rozwiązanie składa się teraz z grudek komórek o różnej wielkości. Ponownie zawiesić grudki komórek w roztworze trypsyny i inhibitora ROCK. Trypsyna kontynuuje rozkład guza, a inhibitor zapobiega śmierci komórki. W regularnych odstępach czasu pipetować roztwór, aby rozbić grudki i rozproszyć komórki. Następnie ponownie zawiesić komórki w roztworze matrycowym o odpowiednim stężeniu.
Umieść krople roztworu na płytce hodowlanej, aby utworzyć kopuły matrycy. Umieść płytki do góry nogami w inkubatorze i poczekaj, aż matryca całkowicie zastygnie. Następnie dodaj pożywkę do hodowli komórkowych i inkubuj prawą stroną do góry. Matryca stanowi rusztowanie wspierające trójwymiarowy wzrost organoidu.
Po zmieleniu umieść kawałki guza w 15-mililitrowej probówce buforu wytrawiającego na 1,5 do 2 godzin trawienia w temperaturze 37 stopni Celsjusza. Pod koniec trawienia rozsiać strawioną tkankę przez odwir
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych