Izolacja komórek międzybłonkowych: technika izolowania pierwotnych komórek międzybłonka z próbki ludzkiej tkanki sieci

Ludzkie pierwotne komórki międzybłonka (HPMC) wyściełają wiele narządów trzewnych, takich jak sieć lub warstwa tkanki tłuszczowej obecna w jamie otrzewnej.

Aby wyizolować komórki międzybłonka, zacznij od zanurzenia ludzkiej próbki sieci w odpowiednim buforze w celu usunięcia nadmiaru czerwonych krwinek lub erytrocytów. Następnie umieść sieć w szklanym naczyniu i zmiel ją na kawałki. Powoduje to dysocjację tkanki, uwalniając HPMC wraz z zanieczyszczającymi krwinkami czerwonymi.

Przenieś kawałki do stożkowej rurki i pozwól im pozostać nieruchomo przez żądany czas. Zmielona tkanka bogata w tłuszcz o niskiej gęstości unosi się do góry, podczas gdy gęste składniki komórkowe osiadają na dole. Następnie odessać ciecz na dole, zawierającą HPMC i RBC, do świeżej probówki.

Odwirować w celu zebrania komórek. Usunąć supernatant zawierający bufor. Zawiesić osad w pożywce wzrostowej międzybłonka i inkubować przez pożądany czas. Pożywka ułatwia selektywny wzrost HPMC w stosunku do erytrocytów.

Obserwuj komórki za pomocą mikroskopu świetlnego, aby potwierdzić wzrost ludzkich komórek międzybłonka w kształcie prostopadłościanu.

Po pobraniu chirurgicznej próbki ludzkiej sieci należy natychmiast zanur