JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 4:27 min. • April 30th, 2023
Organoidy prostaty stanowią przede wszystkim zewnętrzną warstwę komórek nabłonka podstawnego i wewnętrzne warstwy komórek nabłonka światła ułożone wokół centralnego światła.
Obrazowanie w całości pozwala na badanie nienaruszonych organoidów 3D przy zachowaniu ich morfologii i niejednorodności. Aby rozpocząć barwienie, potraktuj organoidy odpowiednim utrwalaczem, aby zablokować ich składniki komórkowe na miejscu, zachowując je w ten sposób. Umyć próbkę, aby usunąć nadmiar utrwalaczy.
Inkubować z koktajlem roztworu blokującego i barwnika barwiącego DNA. Białka w roztworze blokującym biernie wiążą się z niespecyficznymi miejscami komórek i redukują wszelkie zabarwienia tła. Jednocześnie barwnik barwiący DNA barwi jądra komórkowe.
Dodaj dwa zestawy przeciwciał pierwszorzędowych ukierunkowanych na określone antygeny ulegające ekspresji przez dwie składowe populacje komórek. Inkubować z dwoma różnymi przeciwciałami drugorzędowymi sprzężonymi z barwnikiem fluorescencyjnym, które wiążą się z przeciwciałami pierwszorzędowymi. Umyj próbkę w celu usunięcia wszelkich niezwiązanych przeciwciał.
Zanurzaj barwione organoidy sekwencyjnie w rosnących stężeniach roztworów cukru zawierających środki
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych