Dzielenie sferoid w celu hodowli i wysyłki: procedura rozmnażania i przenoszenia sferoid z guza neuroendokrynnego jelita cienkiego

Sferoidy to hodowle in vitro komórek, które same się agregują, tworząc trójwymiarowe struktury sferyczne. Aby rozmnażać sferoidy guza, zacznij od sferoid hodowanych w odpowiedniej macierzy zewnątrzkomórkowej lub ECM, zawartej na płytce hodowlanej.

Rozetrzeć za pomocą mikropipety, aby mechanicznie złamać ECM i poluzować sferoidy. Przenieść mieszaninę sferoidy i ECM do probówki mikrowirówkowej.

Odwirować z niską prędkością, aby granulować sferoidy i oddzielić je od ECM w supernatancie. Zużyty supernatant zawierający ECM należy wyrzucić. Przenieść probówkę zawierającą osad sferoidalny na lód, aby zapobiec zestaleniu się ECM podczas kolejnych etapów.

Uzupełnij osad świeżym skroplonym ECM. W przypadku hodowli cząstkowej należy wymieszać zawartość, wielokrotnie pipetując w górę iw dół, aby oddzielić komórki sferoidalne i uwolnić je do zawiesiny.

Umieść tę mieszaninę zawierającą komórki sferoidalne i ECM w świeżym naczyniu hodowlanym. ECM krzepnie, umożliwiając uwięzienie komórek nowotworowych. Dodaj żądane podłoże wzrostowe. Inkubuj, aby ułatwić wzrost uwięzionych komórek w nowe sferoidy.

Do celów wysyłki przenieść mieszaninę sferoidy-ECM do kolby hodowlanej. Pozwól ECM zestalić się i uw