Barwienie immunologiczne odcinków egzosomalnych złotem: technika wizualizacji markerów diagnostycznych w świetle egzosomalnym

0 views • 3:36 min • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Egzosomy to małe pęcherzyki zewnątrzkomórkowe otaczające różne biomolekuły, które służą jako biomarkery raka.

Aby uwidocznić biomarkery egzosomalne, zacznij od ultracienkich skrawków egzosomalnych osadzonych w żywicy, wspartych na odpowiednich metalowych siatkach do mikroskopii elektronowej. Inkubuj siatki w kroplach glicyny. Glicyna wiąże i neutralizuje reaktywne grupy aldehydowe w sekcjach, aby przezwyciężyć ich interferencję z testem.

Przepłukać próbkę wodą w celu usunięcia pozostałości odczynników. Następnie należy inkubować próbkę w buforze blokującym. Bufor zawiera białka surowicy, które blokują niespecyficzne miejsca wiązania przeciwciał w próbce.

Następnie inkubuj próbkę w żądanym roztworze przeciwciała pierwszorzędowego. Przeciwciała te rozpoznają i wiążą się z docelowymi biomarkerami zlokalizowanymi w świetle egzosomalnym. Wszelkie niezwiązane przeciwciała zmyć odpowiednim buforem.

Teraz przenieś siatki zawierające próbkę do kropli zawierających przeciwciała drugorzędowe sprzężone ze złotem, które przyłączają się do przeciwciał pierwszorzędowych. Nanocząstki złota służą jako markery o dużej gęstości elektronów do wizualizacji dokładnej lokalizacji docelowych cząsteczek. Zmyć wszelkie niezwiązane przeciwciała drugorzędowe odpowiednim buforem.

Na koniec, w ciemnych warunkach, inkubuj siatki sekwencyjnie w roztworach octanu uranylu i cytrynianu ołowiu. Te odczynniki metali ciężkich barwią i zwiększają kontrast cząsteczek organicznych, takich jak lipidy, białka i glikogeny w próbce, odróżniając je od tła.

Obserwuj zabarwione skrawki pod transmisyjnym mikroskopem elektronowym. Biomarkery znakowane złotem pojawiają się jako ciemne cząstki w świetle struktur egzosomów barwionych metalami ciężkimi.

Na początek inkubuj siatki zawierające niebarwione sekcje o grubości 60 nanometrów w 50-mikrolitrowych kroplach 0,02 M glicyny przez 10 minut, aby schłodzić wolne grupy aldehydowe. Następnie opłucz sekcje w 100 mikrolitrach wody destylowanej trzy razy po 10 minut każda. Po ostatnim płukaniu inkubować skrawki przez 1 godzinę w temperaturze pokojowej w PBS zawierającym 1% BSA. Następnie inkubować siatki w kroplach przeciwciała anty-KRS o pojemności od 50 do 100 mikrolitrów przez 1 godzinę.

Następnie umyj kratki pięć razy przez 10 minut każda w kropli PBS zawierającej 0,1% BSA. Następnie przenieść siatki do kropli odpowiedniego przeciwciała drugorzędowego i inkubować skrawki przez 1 godzinę w temperaturze pokojowej. Teraz umyj kratki pięć razy przez 10 minut, każdy z osobną kroplą PBS zawierającą 0,1% BSA. Podwójnie zabarwić skrawki 2% octanem uranylu przez 20 minut w ciemności, a następnie cytrynianem ołowiu Reynoldsa przez 10 minut. Umieść zabarwiony wycinek w transmisyjnym mikroskopie elektronowym i obejrzyj próbkę przy napięciu 80 kV i zobrazuj ją za pomocą oprogramowania mikroskopu.

11:38

Innowacyjna metoda kwantyfikacji egzosomów i pomiaru wielkości

Related Videos

0 Views

09:43

Uproszczona izolacja i obsługa ludzkich pułapek zewnątrzkomórkowych neutrofilów (NET)

Related Videos

0 Views

13:45

Ocena funkcji pęcherzyków zewnątrzkomórkowych podczas zakażenia malarią

Related Videos

0 Views

09:43

Izolacja i charakterystyka egzosomów zawierających RNA

Related Videos

0 Views

09:49

Znakowanie nanozłotem układu endosomalnego drożdży do analiz ultrastrukturalnych

Related Videos

0 Views

09:24

Ilościowa analiza immunozłota o wysokiej rozdzielczości receptorów błonowych w synapsach wstęgowych siatkówki

Related Videos

0 Views

08:49

Egzosomalna analiza miRNA w osoczu pacjentów z niedrobnokomórkowym rakiem płuca (NSCLC) za pomocą qPCR: wykonalne narzędzie do płynnej biopsji

Related Videos

0 Views

11:15

Przygotowanie próbek i obrazowanie egzosomów za pomocą transmisyjnej mikroskopii elektronowej

Related Videos

0 Views

09:16

Szybka charakterystyka oparta na fluorescencji pojedynczych pęcherzyków zewnątrzkomórkowych w ludzkiej krwi z analizą śledzenia nanocząstek

Related Videos

0 Views

09:30

Wykorzystanie rozpraszania wzmocnionego nanoplazmonem i obrazowania mikroskopowego w małym powiększeniu do ilościowego określenia egzosomów pochodzących z guza

Related Videos

0 Views

Last updated: 18 July 2026