Barwienie immunologiczne odcinków egzosomalnych złotem: technika wizualizacji markerów diagnostycznych w świetle egzosomalnym

Egzosomy to małe pęcherzyki zewnątrzkomórkowe otaczające różne biomolekuły, które służą jako biomarkery raka.

Aby uwidocznić biomarkery egzosomalne, zacznij od ultracienkich skrawków egzosomalnych osadzonych w żywicy, wspartych na odpowiednich metalowych siatkach do mikroskopii elektronowej. Inkubuj siatki w kroplach glicyny. Glicyna wiąże i neutralizuje reaktywne grupy aldehydowe w sekcjach, aby przezwyciężyć ich interferencję z testem.

Przepłukać próbkę wodą w celu usunięcia pozostałości odczynników. Następnie należy inkubować próbkę w buforze blokującym. Bufor zawiera białka surowicy, które blokują niespecyficzne miejsca wiązania przeciwciał w próbce.

Następnie inkubuj próbkę w żądanym roztworze przeciwciała pierwszorzędowego. Przeciwciała te rozpoznają i wiążą się z docelowymi biomarkerami zlokalizowanymi w świetle egzosomalnym. Wszelkie niezwiązane przeciwciała zmyć odpowiednim buforem.

Teraz przenieś siatki zawierające próbkę do kropli zawierających przeciwciała drugorzędowe sprzężone ze złotem, które przyłączają się do przeciwciał pierwszorzędowych. Nanocząstki złota służą jako markery o dużej gęstości elektronów do wizualizacji dokładnej lokalizacji docelowych cząsteczek. Z