Wstępna obróbka tkanek FFPE dla RNA CISH: procedura przetwarzania skrawków tkanek zatopionych w parafinie utrwalonych w formalinie do chromogenicznej hybrydyzacji RNA in situ

Wstępna obróbka skrawków tkanek zatopionych w parafinie lub FFPE utrwalonych w formalinie ułatwia ekspozycję kwasów nukleinowych i umożliwia wiązanie znakowanych sond z sekwencją docelową podczas późniejszej hybrydyzacji in situ. Ponadto obróbka wstępna pomaga utrzymać integralność kwasów nukleinowych w komórkach i ogólną morfologię tkanek.

Na początek weź szklane szkiełko z odparafinowaną i ponownie uwodnioną sekcją tkanki FFPE, która Cię interesuje. Potraktuj tkankę nadtlenkiem wodoru o odpowiednim stężeniu i inkubuj.

Nadtlenek wodoru nieodwracalnie dezaktywuje endogenną peroksydazę, która jest fizjologicznie obecna w komórkach. Ten proces blokowania eliminuje możliwość wystąpienia niespecyficznych sygnałów tła podczas kolejnych etapów hybrydyzacji.

Następnie zanurz wycinek tkanki w podgrzewanej kąpieli zawierającej odpowiedni bufor do pobierania antygenu. Inkubuj przez żądany czas. Wysoka temperatura rozszczepia indukowane utrwalaczem chemiczne wiązania krzyżowe w białkach i kwasach nukleinowych, wystawiając zdemaskowane epitopy na działanie sond podczas późniejszego znakowania.

Na koniec potraktuj próbkę odpowiednim roztworem proteazy. Inkubować w środowisku o kontrolowanej wil