Hybrydyzacja sondy i wzmocnienie sygnału w hybrydyzacji RNA in situ: technika wykrywania określonych sekwencji RNA w skrawkach tkanek
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 3:26 min. • April 30th, 2023
Aby wykryć określoną sekwencję RNA w komórce, zacznij od pobrania wycinka tkanki na szklanym szkiełku. Na wycinek tkanki nałożyć odpowiedni bufor hybrydyzacyjny zawierający docelowe sondy RNA.
Sondy te są cząsteczkami RNA w kształcie litery Z, które mają część rozpoznającą cel na jednym końcu i sekwencję ogonową na drugim końcu. Ramię dystansowe łączy te dwa końce.
Teraz inkubuj szkiełko w piecu do hybrydyzacji w optymalnej temperaturze. Sondy RNA w kształcie litery Z wchodzą do komórki i hybrydyzują parami z odpowiednią docelową sekwencją mRNA.
Wyjmij szkiełko z piekarnika. Zanurzyć szkiełko w roztworze myjącym, aby usunąć wszelkie niezwiązane sondy i nadmiar buforu hybrydyzacyjnego.
Następnie dodać roztwór przedwzmacniacza i inkubować. Cząsteczka przedwzmacniacza przyłącza się do sekwencji ogonowej dwóch sąsiednich sond Z. Cząsteczka ta nie wiąże się z pojedynczą sondą Z, zapewniając specyficzność.
Następnie dodać mieszaninę odczynników wzmacniacza i inkubować. Wiele cząsteczek wzmacniacza hybrydyzuje się z pojedynczą sekwencją przedwzmacniacza.
Na koniec oznacz wycinek tkanki żądanymi sondami do znakowania, aby wykryć obecność określonej sekwencji RNA w komórce.
Aby rozpocząć hy
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych