Osadzanie sferoid 3D w kroplach żelu agarozowego: technika zachowywania sferoid do dalszej analizy

Sferoidy to trójwymiarowe sferyczne agregaty komórkowe in vitro, które naśladują mikrośrodowisko guza in vivo i pomagają badać progresję guza. Aby zachować te sferoidy przez osadzanie, zacznij od pobrania sterylnej probówki zawierającej sferoidy w pożądanym buforze.

Potraktuj sferoidy paraformaldehydem. Paraformaldehyd sieciuje białka komórkowe, powodując stabilizację i zachowanie struktury komórki. Odwirować sferoidy i usunąć supernatant zawierający paraformaldehyd. Ponownie zawiesić osad sferoidalny w buforze.

Następnie przygotuj pożądane stężenie stopionego roztworu żelu agarozowego. Zrób kroplę żelu agarozowego na szkiełku mikroskopowym. Utrzymuj szkiełko na bloku grzewczym, aby uniknąć zestalenia się agarozy.

Za pomocą mikropipety z końcówką z szerokim otworem zebrać sferoidy z probówki. Ostrożnie odpipetować sferoidy do środka kropli żelu agarozowego, nie dotykając szkiełka mikroskopowego. Następnie należy inkubować szkiełko w odpowiedniej temperaturze, aby umożliwić ECM zestalenie się i uwięzienie sferoid w środku.

Delikatnie przenieś półstałą kroplę ze szkiełka mikroskopowego do kasety na tkanki. Osadzone sferoidy należy przechowywać w etanolu do czasu dalszej analizy.

Na p