JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 2:22 min. • April 30th, 2023
Mielenie kriogeniczne lub kriomielenie to technika, która umożliwia schłodzenie pozbawionych komórek próbek tkanek do ekstremalnie niskich temperatur i zmielenie na drobny proszek przy zachowaniu ich składu biochemicznego.
Na początek uzyskaj liofilizowaną decelularyczną macierz zewnątrzkomórkową pochodzącą z tkanki lub ECM, który Cię interesuje. Zmiel go, aby uzyskać małe fragmenty.
Następnie przenieś zmielone fragmenty ECM do słoika do mielenia. Wprowadź kule mielące do słoika do mielenia. Zanurzyć załadowany słoik do mielenia w ciekłym azocie, aby zamrozić próbkę w temperaturze -196 °C.
Załaduj schłodzony słoik do systemu kriomielenia. Zamrożoną próbkę poddać kriomieleniu z odpowiednią częstotliwością przez żądany czas.
Podczas kriomielenia słoik do mielenia oscyluje promieniowo w pozycji poziomej. W związku z tym bezwładność kul mielących umożliwia im uderzanie z dużą energią w zamrożoną próbkę na zaokrąglone końce słoika i jej sproszkowanie.
Dodatkowo ruch słoika mielącego w połączeniu z ruchem kul mielących sprzyja intensywnemu mieszaniu próbki w celu uzyskania drobnego proszku o równomiernym rozkładzie wielkości cząstek.
Teraz przenieś kriomielony proszek ECM do szklanej fiolki. Szczelnie zamknąć fiolkę, aby zapobiec narażeniu na działanie wilgoci. Wysuszyć próbkę do czasu jej dalszego użycia.
Użyj ostrych nożyczek chirurgicznych, aby drobno zmielić pozbawioną komórek tkankę. Aby kriomalizować przetworzoną tkankę, napełnij 25-mililitrową komorę mielenia ze stali nierdzewnej do laboratoryjnego systemu młyna kulowego mielonym liofilizowanym ECM i dodaj dwie 10-milimetrowe kule mielące ze stali nierdzewnej.
Zamknij i całkowicie zanurz załadowaną komorę mielenia w ciekłym azocie na 3 minuty. Następnie miel zamrożoną próbkę z częstotliwością 30 Hz przez 3 minuty. Powtarzaj zanurzanie w ciekłym azocie i mielenie, aż ECM zostanie zmielony na drobny proszek.