JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 2:31 min. • April 30th, 2023
Pianki wywodzące się z ECM to wysoce porowate rusztowania otrzymywane przy użyciu macierzy zewnątrzkomórkowej – niekomórkowego składnika mikrośrodowiska tkankowego.
Aby wytworzyć piankę pochodzącą z ECM, zacznij od pobrania jednorodnej zawiesiny ultradrobnego proszku ECM do probówki. Zawiesinę inkubować w ciepłej temperaturze, stale mieszając, aby zapobiec zbrylaniu się ECM.
Następnie za pomocą strzykawki przenieś płynną zawiesinę ECM do żądanej formy. Wstaw formę do lodówki na noc, aby ECM zastygł. ECM krzepnie, tworząc trójwymiarową strukturę sieciową.
Na koniec umieść stałą formę zawierającą ECM w kolbie liofilizatora. Podłączyć kolbę do systemu liofilizatora. Wewnątrz liofilizatora próbka poddawana jest działaniu ultraniskiej temperatury i niskiego ciśnienia. Powoduje to powstawanie kryształków lodu w przestrzeniach śródmiąższowych sieci ECM.
W odpowiednim czasie ciśnienie i temperatura liofilizatora rosną stopniowo. Warunki te ułatwiają sublimację - proces, w którym ciało stałe bezpośrednio przekształca się w postać gazową, a nie ulega topnieniu.
Opary gazowe odparowują, pozostawiając puste przestrzenie wewnątrz sieci ECM, tworząc w ten sposób porowate rusztowanie pochodzące z ECM.
Inkubować zawiesinę ECM w temperaturze 37 stopni Celsjusza z ciągłym mieszaniem przy 120 obr./min, aż zawiesina będzie ciepła. Następnie należy użyć 0,2 molowego kwasu octowego, aby rozcieńczyć zawiesinę próbki do pożądanego stężenia. Za pomocą 3-mililitrowej strzykawki i igły 18G napełnij żądaną formę zawiesiną ECM.
Pianki mogą być wytwarzane w różnych geometriach w zależności od kształtu formy. Przykryj i zamroź foremki w temperaturze minus 20 lub minus 80 stopni Celsjusza. Następnie umieść foremki w kolbie liofilizatora. Podłącz kolbę do laboratoryjnego systemu liofilizatora i susz formy przez 24 godziny lub do całkowitego wyschnięcia.