JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 5:22 min. • April 30th, 2023
Guz zawiera niewielką frakcję komórek macierzystych znanych jako populacja boczna. Komórki te są chemooporne, co czyni je odpowiedzialnymi za nawrót raka.
Aby wyizolować populację boczną komórek rakowych, należy rozpocząć od dodania Hoechst - fluorescencyjnego roztworu barwnika - do fiolki zawierającej zawiesinę komórek rakowych. Wewnątrz normalnych komórek rakowych cząsteczki Hoechst dostają się do jądra i wiążą się z regionem bogatym w A-T w DNA, co prowadzi do wysokiej fluorescencji w tych komórkach.
W przeciwieństwie do tego, populacja boczna zawiera wysokie stężenie transporterów ABC - pomp wypływowych, które szybko usuwają cząsteczki barwnika z komórki. Ten aktywny wypływ cząsteczek barwnika sprawia, że populacja boczna fluoryzuje z niską intensywnością.
Teraz weź kolejną fiolkę z komórkami rakowymi leczonymi Hoechst i dodaj do niej Verapamil. Ta fiolka działa jako kontrola, ponieważ Verapamil blokuje transportery ABC. Ten etap powoduje zmniejszenie wypływu Hoechst i zatrzymanie barwnika wewnątrz bocznych komórek populacyjnych.
Następnie przeciwbarwić komórki w obu fiolkach za pomocą jodku propydyny. Jodek propidyny dostaje się wyłącznie do jądra martwych komórek i interkaluj
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych