Ekstrakcja egzosomów na bazie kulek magnetycznych: technika izolowania określonych egzosomów z biopłynów
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 4:03 min. • April 30th, 2023
Egzosomy to zewnątrzkomórkowe struktury pęcherzykowe wydzielane przez komórki do płynów biologicznych. Aby wychwycić określone egzosomy z płynów biologicznych, zacznij od umieszczenia w probówce kulek magnetycznych pokrytych streptawidyną.
Do tej probówki dodaj biotynylowane przeciwciała anty-ludzkie. Biotyna obecna na przeciwciałach ma wysokie powinowactwo do streptawidyny obecnej na kulkach magnetycznych. Powoduje to koniugację przeciwciał z kulkami magnetycznymi.
Następnie dodaj bogaty w białko roztwór blokujący do probówki zawierającej kulki magnetyczne znakowane przeciwciałami. Białka w roztworze blokującym wiążą się z wolnymi miejscami na kulkach magnetycznych i zwiększają specyficzność wiązania egzosomów.
Teraz uzupełnij probówkę próbką biopłynu bogatego w egzosomy. Inkubować probówkę z mieszaniem. Egzosomy w płynie biologicznym wykazują specyficzne receptory powierzchniowe, które pomagają im wiązać się z przeciwciałami przyczepionymi do powierzchni kulek magnetycznych.
Następnie umieść rurkę w polu magnetycznym. Pod wpływem pola magnetycznego kulki magnetyczne związane z egzosomem przyczepiają się do powierzchni rurki. Następnie za pomocą mikropipety odessać pozostały biopł
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych