JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 4:41 min. • April 30th, 2023
Salisphere to in vitro, samoagregujące się kultury komórek nabłonkowych pochodzących z gruczołu ślinowego. Aby wyhodować salisphere, zacznij od pobrania tkanki ludzkiego gruczołu ślinowego na płytce hodowlanej.
Za pomocą nożyczek zmiel tkankę na drobne kawałki. Następnie uzupełnij te kawałki roztworem dysocjacyjnym zawierającym kolagenazę i enzymy dyspazy i inkubuj. Enzymy te trawią macierz zewnątrzkomórkową obecną w tkance.
Ponadto rozcierać w celu homogenizacji tkanki. Ten etap uwalnia komórki nabłonkowe i erytrocyty do roztworu. Następnie użyj sitka komórkowego i przefiltruj homogenat tkankowy do świeżej stożkowej probówki, aby usunąć niestrawione kawałki tkanek i zanieczyszczenia. Odwirować do granulowania komórek.
Po odwirowaniu odrzucić supernatant i ponownie zawiesić osad komórkowy w buforze do lizy RBC. Bufor ten rozrywa erytrocyty obecne w zawiesinie komórki.
Teraz odwiruj, aby granulować komórki nabłonka. Zawiesić osad w odpowiednim podłożu do wzrostu komórek nabłonkowych. Dodatkowo przygotuj płytkę do hodowli salisphere, pokrywając ją dobrze upłynnioną matrycą błony podstawnej lub BMM. Inkubować, aby matryca mogła się zestalić.
Na koniec dodaj zawiesinę komórek nabłonka
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych