Chirurgiczne wstrzyknięcie Cisterna Magna: metoda podawania komórek nowotworowych bezpośrednio do ośrodkowego układu nerwowego modelu mysiego

Mysi mózg jest wyściełany trzema warstwami opon mózgowych - najbardziej zewnętrzną błoną opony twardej, środkową błoną pajęczynówkową i najbardziej wewnętrzną błoną pia.

W tylnej części mózgu pajęczynówka i błona pajęczynówkowa są interweniowane przez przestrzeń podpajęczynówkową wypełnioną mózgowo-rdzeniową lub płynem mózgowo-rdzeniowym, zwaną cisterna magna.

Aby wykonać wstrzyknięcie doglebowo-mostkowe komórek nowotworowych, zacznij od pobrania znieczulonego modelu mysiego. Przygotuj mysz, usuwając włosy z brzusznej powierzchni głowy.

Teraz umieść mysz w pozycji leżącej i przymocuj jej głowę do ramy stereotaktycznej. Ustaw nos myszy, kierując go lekko w dół, aby zrównać grzbiet z cisterna magna.

Za pomocą nożyczek wykonaj małe nacięcie w linii środkowej na tylnym końcu mózgu, na poziomie uszu.

Ostrożnie odciągnij na bok powierzchowną warstwę mięśni. Cisterna magna może być wizualizowana jako odwrócony trójkąt pokryty przezroczystą membraną opony twardej.

Następnie weź strzykawkę zawierającą krążącą zawiesinę komórek nowotworowych.

Utrzymując otaczające mięśnie cofnięte, włóż strzykawkę pod błonę opony twardej, przebijając przez błonę pajęczynówki. Ten etap umożliwia wstrzyknięcie komórek nowotworowych bezpośrednio do płynu mózgowo-rdzeniowego obecnego w cisterna magna.

Na koniec zamknij miejsce nacięcia, nakładając klipsy na rany i pozwól myszy dojść do siebie.

Zacznij od wstrzyknięcia myszowi podskórnie 1 miligrama na kilogram buprenorfiny o przedłużonym uwalnianiu. Po znieczuleniu myszy należy przygotować ją do zabiegu. Przytnij miejsce operacji z wystarczającą powierzchnią ograniczną, aby futro nie zanieczyściło miejsca nacięcia.

Ogol sierść na całej powierzchni głowy i przygotuj skórę za pomocą sterylnej techniki. Następnie nasącz miejsce bakteriobójczym środkiem antyseptycznym do skóry, działającym od środka miejsca do obrzeży i pozostaw do wyschnięcia.

Ustaw ciało tak, aby kręgosłup był utrzymywany na poziomie cisterna magna. Wywierając lekką przyczepność do ogona, umieść taśmę u podstawy ogona, aby go zabezpieczyć.

Zastosuj sterylną serwetę lub sterylną obłogę z tworzywa sztucznego na podłożu samoprzylepnym, aby chronić miejsce operacji przed zanieczyszczeniem. Mając szyję w pełnym wyprostu, przesuń końcówki nożyczek chirurgicznych w dół, lekko naciskając na kość potyliczną, zaczynając tuż między małżowinami usznymi.

Wykonaj małe 3- do 5-milimetrowe nacięcie linii środkowej nieco powyżej wyczuwalnej wklęsłości. Pobierz 5 mikrolitrów zawiesiny komórek do strzykawki Hamiltona o pojemności 30 g. Użyj kleszczyków z końcówką z końcówką o średnicy od 1 do 2 milimetrów, aby delikatnie docisnąć cisterna magna.

Umieść końcówki w pozycji zamkniętej i otwórz je, wywierając nacisk na oponę twardą w dół. Powtarzaj rozbieranie, aż błona opony twardej będzie łatwa do zidentyfikowania, a związane z nią naczynia krwionośne będą widoczne w odsłoniętym obszarze.

Trzymając kleszcze, otwórz je, aby cofnąć otaczające mięśnie. Wprowadź igłę 30G bez rdzenia pod oponę twardą, aby uwidocznić skos, upewniając się, że igła jest wprowadzana tylko tuż za samym skosem.

Powoli wysuń tłok strzykawki i dostarcz komórki tuż poniżej opony twardej. W przypadku stwierdzenia wycieku w miejscu wstrzyknięcia, należy delikatnie docisnąć aplikatorem z bawełnianą końcówką. Zamknij skórę, przykładając klips do ran lub mikrokroplę kleju do skóry.

Monitoruj myszy codziennie po operacji przez pierwszy tydzień. Jeśli mysz wydaje się odczuwać ból lub niepokój, należy ją leczyć podskórnym zastrzykiem 10 miligramów na kilogram karprofenu, raz na 12 do 24 godzin przez okres do 5 dni w oparciu o konsultację weterynaryjną i dyrektywę.