Model komórek macierzystych glejaka znakowany lucyferazą: metoda przygotowania komórek macierzystych glejaka znakowanych lucyferazą do badań terapeutycznych in vitro za pośrednictwem lentiferazy

Komórki macierzyste glejaka lub GSC to subpopulacja glejaka - nowotworu komórek glejowych w mózgu.

Znakowanie tych GSC enzymami bioluminescencyjnymi, takimi jak lucyferazy, pomaga w ustanowieniu wysokoprzepustowych testów obrazowania do badań przesiewowych leków.

Aby przygotować GSC znakowane lucyferazy, zacznij od hodowli GSC w odpowiednim pożywce wzrostowej.

Odwirować kulturę, aby uzyskać osad komórkowy i usunąć supernatant.

Do granulatu dodać odpowiednie enzymy trawienne. Enzymy te dysocjują skupiska komórek i degradują wszelkie ślady tkanki łącznej, aby uzyskać zawiesinę pojedynczej komórki.

Teraz odwiruj zawiesinę jednokomórkową i usuń supernatant. Zawiesić osad na świeżym podłożu.

Następnie wysiewaj pożądane stężenie komórek na płytce hodowlanej.

Inkubuj kulturę i pozwól komórkom przylegać do płytki hodowlanej.

Następnie dodać pożądane miano konstruktu genu zawierającego wirusa dla białka zielonej fluorescencji wzmocnionego lucyferazą lub EGFP i inkubować.

Wirus oddziałuje z receptorami powierzchniowymi GSC, wywołując uwalnianie wirusowego RNA zawierającego lucyferazę-EGFP. Enzymy komórkowe katalizują odwrotną transkrypcję RNA do dwuniciowego DNA i integrują go z genomem GSC.