Test oparty na bioluminescencji komórkowej: wysokoprzepustowa metoda kombinatorycznych badań przesiewowych leków
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 3:17 min. • April 30th, 2023
Bioluminescencja komórkowa jest bardzo czułym i szybkim podejściem do badań przesiewowych leków przeciwnowotworowych na dużą skalę.
Technika ta wykorzystuje komórki nowotworowe wyrażające lucyferazy - enzym, który katalizuje reakcję chemiczną wytwarzającą światło, powodując, że komórki gospodarza świecą w ciemności. Intensywność emitowanej luminescencji jest wprost proporcjonalna do gęstości żywych komórek.
Na początek zasiej komórki wykazujące ekspresję lucyferazy na optycznie przezroczystej płytce hodowlanej pokrytej macierzą zewnątrzkomórkową lub ECM i inkubuj.
Podczas inkubacji ECM dobrze sprzyja przyłączaniu się komórek do hodowli.
Następnie weź skoncentrowane zapasy kombinacji leków i dodaj różne objętości pożywki hodowlanej, aby przygotować seryjne rozcieńczenie mieszaniny leków.
Teraz usuń pożywkę hodowlaną z przylegających komórek. Dodać różne rozcieńczenia kombinacji leków i inkubować.
Podczas inkubacji kombinacja leków działa synergistycznie na cele komórkowe.
Teraz usuń pożywkę zawierającą lek i dodaj świeżą pożywkę zawierającą lucyferynę.
Lucyferyna dyfunduje przez błonę i wnika do komórek. Lucyferazy wyrażane przez komórki wykorzystują komórkowe ATP do utleniania lucy
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych