Test oparty na bioluminescencji komórkowej: wysokoprzepustowa metoda kombinatorycznych badań przesiewowych leków

0 views • 3:17 min • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bioluminescencja komórkowa jest bardzo czułym i szybkim podejściem do badań przesiewowych leków przeciwnowotworowych na dużą skalę.

Technika ta wykorzystuje komórki nowotworowe wyrażające lucyferazy - enzym, który katalizuje reakcję chemiczną wytwarzającą światło, powodując, że komórki gospodarza świecą w ciemności. Intensywność emitowanej luminescencji jest wprost proporcjonalna do gęstości żywych komórek.

Na początek zasiej komórki wykazujące ekspresję lucyferazy na optycznie przezroczystej płytce hodowlanej pokrytej macierzą zewnątrzkomórkową lub ECM i inkubuj.

Podczas inkubacji ECM dobrze sprzyja przyłączaniu się komórek do hodowli.

Następnie weź skoncentrowane zapasy kombinacji leków i dodaj różne objętości pożywki hodowlanej, aby przygotować seryjne rozcieńczenie mieszaniny leków.

Teraz usuń pożywkę hodowlaną z przylegających komórek. Dodać różne rozcieńczenia kombinacji leków i inkubować.

Podczas inkubacji kombinacja leków działa synergistycznie na cele komórkowe.

Teraz usuń pożywkę zawierającą lek i dodaj świeżą pożywkę zawierającą lucyferynę.

Lucyferyna dyfunduje przez błonę i wnika do komórek. Lucyferazy wyrażane przez komórki wykorzystują komórkowe ATP do utleniania lucyferyny i emitowania sygnałów świetlnych.

Określ ilościowo bioluminescencję komórkową w systemie obrazowania.

Spadek emisji światła wraz ze wzrostem stężenia leku wskazuje na zmniejszoną żywotność komórek. Wiąże się to z antyproliferacyjnym działaniem leku na komórki docelowe.

Pokryj 96-dołkowe dolne płytki optyczne mieszaniną macierzy zewnątrzkomórkowej, taką jak Matrigel, i inkubuj je przez 1 godzinę w temperaturze 37 stopni Celsjusza. Usuń nadmiar mieszanki i delikatnie spłucz płytki raz za pomocą PBS.

Następnie wysiewaj komórki XG387-Luc o gęstości 1,000 komórek w 100 mikrolitrach pożywki hodowlanej do każdego dołka powlekanych płytek i hoduj je przez noc. Następnego dnia obserwuj komórki pod mikroskopem, aby potwierdzić ich przyczepienie do płytki.

Następnie należy przygotować 200-mikromolowy roztwór temozolomidu i 2-mikromolowe roztwory docelowych środków w pożywce hodowlanej. W przypadku skojarzonych badań przesiewowych leków należy usunąć ślepą próbę i dodać pożywkę zawierającą 200-mikromolowy temozolomid lub 2-mikromolowy środek celowany, lub kombinację obu, do każdej studzienki w celu uzyskania 3 kontrprób technicznych na zabieg.

Inkubuj płytkę w temperaturze 37 stopni Celsjusza i 5% dwutlenku węgla przez 3 dni. Wykonaj zdjęcia bioluminescencji komórkowej w płytce za pomocą systemu obrazowania widmowego IVIS. Korzystając z wbudowanego oprogramowania, utwórz wiele okrągłych obszarów obszaru zainteresowania i określ ilościowo bioluminescencję komórkową.

04:47

Autonomicznie bioluminescencyjne komórki ssaków do ciągłego monitorowania cytotoksyczności w czasie rzeczywistym

Related Videos

0 Views

09:17

Obrazowanie bioluminescencyjne immunokompetentnego modelu zwierzęcego glejaka

Related Videos

0 Views

09:09

Wysokowydajne testy w czasie rzeczywistym z podwójnym odczytem wewnątrzkomórkowej aktywności przeciwdrobnoustrojowej i cytotoksyczności komórek eukariotycznych

Related Videos

0 Views

10:38

Monitorowanie autonomicznych rytmów zegara okołodobowego ekspresji genów za pomocą reporterów bioluminescencji lucyferazy

Related Videos

0 Views

02:57

Test oparty na fluorescencji z wykorzystaniem zmodyfikowanych limfocytów do badań przesiewowych związków immunomodulujących

Related Videos

0 Views

12:55

Wysokoprzepustowe funkcjonalne badania przesiewowe przy użyciu domowego testu lucyferazy o podwójnym blasku

Related Videos

0 Views

10:13

Multipleksowana platforma przesiewowa oparta na lucyferazie do badania transdukcji sygnału związanego z rakiem w hodowanych komórkach

Related Videos

0 Views

09:39

Uwrażliwienie cyklazy adenylowej na leki: usprawnienie i miniaturyzacja testów do zastosowań przesiewowych małych cząsteczek i siRNA

Related Videos

0 Views

08:43

Test limfocytów oparty na fluorescencji, odpowiedni do wysokoprzepustowych badań przesiewowych małych cząsteczek

Related Videos

0 Views

09:57

System badań przesiewowych skuteczności i cytotoksyczności inhibitorów ukierunkowanych na wewnątrzkomórkowe prątki gruźlicy

Related Videos

0 Views

Last updated: 18 July 2026