Oczyszczanie jąder oparte na wirowaniu gradientowym: technika otrzymywania ultraczystej frakcji nienaruszonych jąder za pomocą wirowania w gradicynacji gęstości

Aby wyizolować i oczyścić nienaruszone jądra, zacznij od pobrania surowej frakcji jąder do probówki. Frakcja zawiera nienaruszone jądra wraz z połamanymi fragmentami jąder i szczątkami.

Zmieszać tę frakcję z odpowiednim podłożem o gradiencie gęstości, tak aby utworzyła zawiesinę o najniższym stężeniu.

Teraz roztwory warstwowe o rosnącej gęstości tego samego ośrodka gradientowego pod wstępnie przygotowaną frakcją jąder surowych w celu wygenerowania wieloetapowego nieciągłego gradientu gęstości. Ten krok pozwala frakcji jąder surowych uformować pasmo na szczycie gradientu.

Następnie odwiruj probówkę z niską prędkością.

Opierając się na różnicach w kształcie i masie, nienaruszone jądra migrują inaczej niż szczątki i fragmenty jądrowe. Powoduje to, że nienaruszone jądra tworzą osobne pasmo.

Po odwirowaniu zlokalizuj wyraźne pasmo składające się z nienaruszonych jąder na granicy roztworów gradientu gęstości.

Za pomocą pipety odessać górne warstwy gradientu, aby ułatwić dostęp do pasma czystych jąder. Zebrać prążek zawierający jądra do świeżej probówki.

Wizualizuj te jądra pod mikroskopem świetlnym. Nienaruszone jądra wydają się idealnie okrągłe z otaczającą je nienaruszoną błoną jądrową