JoVE Encyclopedia of Experiments
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 2:37 min • April 30th, 2023
Aby kriokonserwować próbkę mózgu myszy przez szybkie zamrażanie, zacznij od pobrania zlewki wypełnionej roztworem izopentanu - cieczą o wysokiej przewodności - i zanurz ją w słoiku zawierającym ciekły azot.
Zamrozić izopentan, aż roztwór stanie się lepki.
W międzyczasie weź całą próbkę mózgu myszy z przedrostkiem w roztworze sacharozy. Zabieg ten zapobiega deformacji tkanki mózgowej w kolejnych etapach.
Wyjmij próbkę mózgu z roztworu sacharozy i osusz ją, aby usunąć wszelkie ślady sacharozy.
Następnie umieść mózg w pożądanej orientacji w głębokim kriomold zawierającym warstwę podłoża osadzającego.
Nałóż mózg na kriomold z większą ilością osadzonych pożywek, aby upewnić się, że cały narząd jest pokryty.
Następnie zanurz kriomoder zawierający osadzony mózg we wstępnie schłodzonej kąpieli izopentanowej. Szybkie schładzanie tkanki mózgowej do bardzo niskiej temperatury zapewnia zachowanie architektury mózgu bez żadnych zniekształceń.
Teraz pozwól próbce mózgu zamrozić, aż osadzające podłoże zestali się, tworząc galaretowatą warstwę wokół mózgu, utrzymując go na miejscu.
Po zamrożeniu wyjmij kriomodr z kąpieli izopentanowej i zawiń kriokonserwowany mózg myszy w foliowy arkusz.
Przechowywać próbkę w temperaturze minus osiemdziesięciu stopni Celsjusza do dalszej analizy histologicznej.
Aby przygotować się do krioprezerwacji, napełnij słoik zimnym izopentanem/2-metylobutanem i umieść słoik w pojemniku wypełnionym ciekłym azotem. Podczas gdy rozpuszczalnik schładza się, osusz mózg na kawałku bibuły filtracyjnej i umieść mózg w oznakowanej krioformie.
Ostrożnie dodaj około 5 mililitrów środka do cięcia o optymalnej temperaturze do środka kriomoldu i umieść mózg w formie w pożądanej orientacji. Za pomocą czystych kleszczy szybko umieść kriomodan w schłodzonym izopentanie/2-metylobutanie na 30 do 40 sekund.
Gdy podłoże tnące zastygnie, przenieś kriomoder na suchy lód i zawiń kriomald oraz zamrożoną tkankę mózgową w folię aluminiową do przechowywania w temperaturze minus 80 stopni Celsjusza.
Niniejszy artykuł szczegółowo opisuje proces krio konserwacji próbek mózgu myszy z wykorzystaniem technik szybkiego mrożenia. Metoda ta zapewnia zachowanie architektury mózgu do późniejszej analizy histologicznej.
Kriokonserwacja tkanki mózgowej myszy poprzez gwałtowne zamrażanie umożliwia wysokiej jakości analizę histologiczną dzięki zachowaniu rodzimej architektury tkanki. Technika ta wspiera walidację celu oraz ograniczanie ryzyka mechanistycznego w procesie odkrywania leków w neurologii, zapewniając wiarygodne odczyty morfologiczne. Odpowiada ona na krytyczną potrzebę powtarzalnego przygotowania próbek w badaniach przedklinicznych z wykorzystaniem tkanki mózgowej.
Metoda ta wpisuje się w kontinuum procesu odkrywania leków – od wczesnej walidacji celu po badania przedkliniczne, w których nienaruszalność histologiczna wpływa na decyzje dotyczące kontynuacji lub przerwania badań.
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Ostatnia aktualizacja: 29 sierpnia 2026