Kriokonserwacja mózgu myszy przez szybkie zamrażanie: technika szybkiego zamrażania całej próbki mózgu myszy do analizy histologicznej

0 wyświetleń2:37 min • April 30th, 2023

Aby kriokonserwować próbkę mózgu myszy przez szybkie zamrażanie, zacznij od pobrania zlewki wypełnionej roztworem izopentanu - cieczą o wysokiej przewodności - i zanurz ją w słoiku zawierającym ciekły azot.

Zamrozić izopentan, aż roztwór stanie się lepki.

W międzyczasie weź całą próbkę mózgu myszy z przedrostkiem w roztworze sacharozy. Zabieg ten zapobiega deformacji tkanki mózgowej w kolejnych etapach.

Wyjmij próbkę mózgu z roztworu sacharozy i osusz ją, aby usunąć wszelkie ślady sacharozy.

Następnie umieść mózg w pożądanej orientacji w głębokim kriomold zawierającym warstwę podłoża osadzającego.

Nałóż mózg na kriomold z większą ilością osadzonych pożywek, aby upewnić się, że cały narząd jest pokryty.

Następnie zanurz kriomoder zawierający osadzony mózg we wstępnie schłodzonej kąpieli izopentanowej. Szybkie schładzanie tkanki mózgowej do bardzo niskiej temperatury zapewnia zachowanie architektury mózgu bez żadnych zniekształceń.

Teraz pozwól próbce mózgu zamrozić, aż osadzające podłoże zestali się, tworząc galaretowatą warstwę wokół mózgu, utrzymując go na miejscu.

Po zamrożeniu wyjmij kriomodr z kąpieli izopentanowej i zawiń kriokonserwowany mózg myszy w foliowy arkusz.

Przechowywać próbkę w temperaturze minus osiemdziesięciu stopni Celsjusza do dalszej analizy histologicznej.

Aby przygotować się do krioprezerwacji, napełnij słoik zimnym izopentanem/2-metylobutanem i umieść słoik w pojemniku wypełnionym ciekłym azotem. Podczas gdy rozpuszczalnik schładza się, osusz mózg na kawałku bibuły filtracyjnej i umieść mózg w oznakowanej krioformie.

Ostrożnie dodaj około 5 mililitrów środka do cięcia o optymalnej temperaturze do środka kriomoldu i umieść mózg w formie w pożądanej orientacji. Za pomocą czystych kleszczy szybko umieść kriomodan w schłodzonym izopentanie/2-metylobutanie na 30 do 40 sekund.

Gdy podłoże tnące zastygnie, przenieś kriomoder na suchy lód i zawiń kriomald oraz zamrożoną tkankę mózgową w folię aluminiową do przechowywania w temperaturze minus 80 stopni Celsjusza.

09:13

Kriokonserwacja bloków tkanki kory mózgowej w celu generowania silnie wzbogaconych kultur neuronalnych

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

06:37

Jednoczesna kriosekcja wielu mózgów gryzoni

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

07:06

Gromadzenie zamrożonych obszarów mózgu gryzoni do dalszych analiz

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

28:32

Szybkie mrożenie i kriosekcjonowanie mózgu myszy w stadium E12.5

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

03:30

Błyskawiczne zamrażanie tkanki mięśniowej do cięcia: protokół uzyskiwania ultracienkich skrawków szybko zamrożonej mysiej tkanki mięśniowej

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

02:37

Sekcja zamrożonej tkanki mózgowej myszy: procedura uzyskiwania cienkich zamrożonych skrawków tkanki z zamrożonej tkanki mózgowej myszy

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

04:44

Przetwarzanie mózgu myszy do dalszej analizy

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

02:19

Znakowanie immunologiczne białek błony neuronalnej w pękniętej przez lód próbce tkanki mózgowej myszy

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

08:27

Nielosowy mysi model do farmakologicznej reaktywacji Mecp2 na nieaktywnym chromosomie X

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

07:36

Połączenie hybrydyzacji fluorescencji in situ multipleksowej z immunohistochemią fluorescencyjną na świeżo zamrożonych lub utrwalonych wycinkach mózgu myszy

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

Ostatnia aktualizacja: 29 sierpnia 2026