Kriokonserwowane utrwalanie i barwienie skrawków tkanek: procedura przetwarzania zamrożonych skrawków tkanki mózgowej do mikrodysekcji laserowej

0 views • 2:41 min • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Aby zróżnicować określone populacje komórek w heterogenicznej tkance guza mózgu myszy w celu ich późniejszej izolacji, zacznij od pobrania szklanego szkiełka z kriokonserwowanym odcinkiem tkanki guza mózgu, który jest przedmiotem zainteresowania.

Sekwencyjnie inkubować tkankę w malejących stężeniach etanolu. Etanol rozpuszcza podłoże osadzające, które wniknęło w tkankę i utrwala tkankę, zachowując integralność kwasu nukleinowego.

Dodatkowo etanol nawadnia tkankę, umożliwiając równomierne barwienie podczas kolejnych etapów.

Teraz potraktuj tkankę fioletem krezylowym. Fiolet krezylowy - barwnik zasadowy - barwi kwaśne składniki komórkowe, takie jak kwasy nukleinowe.

Następnie przeciwbarwić tkankę Eozyną Y. Eozyna Y - kwaśny barwnik - barwi podstawowe składniki komórkowe, takie jak białka cytoplazmatyczne.

Ten etap barwienia różnicowego pomaga odróżnić cytoplazmę od innych struktur komórkowych, umożliwiając identyfikację komórek będących przedmiotem zainteresowania.

Po barwieniu zanurz tkankę w rosnącym stężeniu etanolu, aby odwodnić tkankę i uniknąć nadmiernego zniekształcenia tkanki.

Następnie umyj chusteczkę ksylenem. Ksylen wypiera i usuwa etanol z wycinka tkankowego.

Na koniec dodaj odpowiedni roztwór montażowy do sekcji tkanki, aby zachować morfologię tkanki.

Przetworzony wycinek tkanki jest gotowy do wykorzystania do mikrodysekcji laserowej – procesu, który pozwala na precyzyjne wyizolowanie określonych komórek z tkanki.

Zanurz szkiełka w 30-sekundowym sekwencyjnym zanurzeniu w etanolu opadającym, a następnie barwieniu roztworem fioletu krystalicznego przez 20 sekund i 5 sekund w 0,5% roztworze eozyny Y.

Pod koniec inkubacji eozyny Y należy użyć bibuły filtracyjnej, aby osuszyć szkiełka i odwodnić szkiełka w sekwencyjnym rosnącym zanurzeniu w etanolu. Po 60-sekundowym zanurzeniu w etanolu płucz szkiełka w pojemniku z ksylenem przez 3 minuty.

Następnie wysuszyć szkiełka na powierzchni wolnej od RNaz w temperaturze pokojowej przez 10 sekund przed zamontowaniem próbek w podłożu montażowym przygotowanym z wodą wolną od RNaz. Po 10 do 20 sekundach przenieś szkiełka na platformę mikroskopową do mikroskopu.

07:30

Podstawa immunohistochemii na kriowyciętej tkance mózgowej szczura: przykładowe barwienie mikrogleju i neuronów

Related Videos

0 Views

08:35

Organotypowy model hodowli warstwowej glejaka ludzkiego do badania migracji komórek nowotworowych i specyficznych dla pacjenta skutków leków przeciwinwazyjnych

Related Videos

0 Views

07:58

Swobodne barwienie immunologiczne mózgów myszy

Related Videos

0 Views

28:32

Błyskawiczne zamrażanie i kriosekcja mózgu myszy E12.5

Related Videos

0 Views

10:25

Protokoły przygotowania, obrazowania i analizy próbek dla mikroskopii skaningowej

Related Videos

0 Views

02:37

Sekcja zamrożonej tkanki mózgowej myszy: procedura uzyskiwania cienkich zamrożonych skrawków tkanki z zamrożonej tkanki mózgowej myszy

Related Videos

0 Views

04:44

Przetwarzanie mózgu myszy do dalszej analizy

Related Videos

0 Views

13:32

Laserowe wychwytywanie mikrodysekcji wzbogaconych populacji neuronów lub pojedynczych neuronów do analizy ekspresji genów po urazowym uszkodzeniu mózgu

Related Videos

0 Views

05:51

Domózgowo-komorowe i wewnątrznaczyniowe wstrzykiwanie cząstek wirusowych i mikrogranulek fluorescencyjnych do mózgu noworodka

Related Videos

0 Views

09:29

Stereotaktyczne przechwytywanie laserowe pod kontrolą atlasu Mikrodysekcja obszarów mózgu dotkniętych urazem urazowym

Related Videos

0 Views

Last updated: 18 July 2026