Kriokonserwowane utrwalanie i barwienie skrawków tkanek: procedura przetwarzania zamrożonych skrawków tkanki mózgowej do mikrodysekcji laserowej
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 2:41 min. • April 30th, 2023
Aby zróżnicować określone populacje komórek w heterogenicznej tkance guza mózgu myszy w celu ich późniejszej izolacji, zacznij od pobrania szklanego szkiełka z kriokonserwowanym odcinkiem tkanki guza mózgu, który jest przedmiotem zainteresowania.
Sekwencyjnie inkubować tkankę w malejących stężeniach etanolu. Etanol rozpuszcza podłoże osadzające, które wniknęło w tkankę i utrwala tkankę, zachowując integralność kwasu nukleinowego.
Dodatkowo etanol nawadnia tkankę, umożliwiając równomierne barwienie podczas kolejnych etapów.
Teraz potraktuj tkankę fioletem krezylowym. Fiolet krezylowy - barwnik zasadowy - barwi kwaśne składniki komórkowe, takie jak kwasy nukleinowe.
Następnie przeciwbarwić tkankę Eozyną Y. Eozyna Y - kwaśny barwnik - barwi podstawowe składniki komórkowe, takie jak białka cytoplazmatyczne.
Ten etap barwienia różnicowego pomaga odróżnić cytoplazmę od innych struktur komórkowych, umożliwiając identyfikację komórek będących przedmiotem zainteresowania.
Po barwieniu zanurz tkankę w rosnącym stężeniu etanolu, aby odwodnić tkankę i uniknąć nadmiernego zniekształcenia tkanki.
Następnie umyj chusteczkę ksylenem. Ksylen wypiera i usuwa etanol z wycinka tkankowego.
Na koniec do
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych