Izolacja pęcherzyków zewnątrzkomórkowych pochodzących z mikrogleju oparta na SEC: technika izolowania pęcherzyków zewnątrzkomórkowych z pożywek hodowlanych kondycjonowanych mikroglejem

Komórki mikrogleju uwalniają mediatory immunologiczne w postaci pęcherzyków zewnątrzkomórkowych lub EV, w tym większych ciał apoptotycznych i mniejszych mikropęcherzyków, do pożywek wzrostowych in vitro.

Aby wyizolować EV, zacznij od pobrania pożywek kondycjonowanych mikroglejem. Ta pożywka hodowlana zawiera komórki mikrogleju wraz z uwolnionymi EV. Odwirować pożywkę, aby granulować komórki.

Zbierz supernatant zawierający EV, szczątki i agregaty białkowe w świeżej probówce. Ponownie odwirować, aby usunąć resztki komórkowe i duże ciała apoptotyczne.

Przenieść supernatant do probówki ultrawirówkowej. Wirować z dużą prędkością.

Odrzucić supernatant zawierający zużyte pożywki i ponownie zawiesić EV i granulki agregatu białkowego w żądanym buforze.

Równocześnie należy pobrać kolumnę chromatograficzną z wyłączeniem wielkości z odpowiednim filtrem u podstawy.

Szczelnie upakować kolumnę matrycą do filtracji żelu składającą się z kulistych kulek żelowych, które tworzą porowate sito o określonej wielkości porów.

Załaduj zawiesinę EV i agregatu białkowego na fazę stacjonarną.

Gdy zawiesina przechodzi przez kolumnę, większe pojazdy elektryczne przemieszczają się przez przestrzenie międzycząste