JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 3:05 min. • April 30th, 2023
W odpowiedzi na niektóre atraktanty chemiczne uwalniane przez guzy lite, komórki odpornościowe, takie jak makrofagi związane z nowotworem lub TAM, infiltrują guzy lite. Następnie te TAM ułatwiają progresję guza.
Aby zbadać interakcje między TAM a komórkami nowotworowymi in vitro, zacznij od pobrania płytki wielodołkowej z błoniastą wkładką. Taki układ tymczasowo rozdziela studnię na dwa przedziały.
Następnie dodaj zawiesinę TAM do górnej komory transwella.
Uzupełnij dolną komorę transwell kondycjonowaną pożywką wzbogaconą o chemiczne atraktanty wydzielane przez komórki nowotworowe.
Inkubuj płytkę przez żądany czas.
Podczas inkubacji modulatory chemiczne przyciągają TAM. Prowadzi to do przemieszczania się TAM do dolnej komory przez porowatą membranę wkładu poprzez chemotaksję wywołaną chemicznie.
Teraz wyjmij wkładkę ze studni. Przenieść kondycjonowaną pożywkę zawierającą migrującą populację TAM na odpowiednią płytkę do pomiaru fluorescencyjnego.
Potraktuj komórki buforem do lizy zawierającym barwnik fluorescencyjny. Ten bufor lizuje makrofagi. W końcu cząsteczki barwnika wiążą się z kwasami nukleinowymi, wytwarzając zwiększoną fluorescencję.
Na koniec zeskanuj płytkę za pomocą czyt
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych