Test syntezy DNA: technika oceny syntezy DNA w proliferujących komórkach przy użyciu radioaktywnej tritacji tymidyny

Rozpocznij od pobrania płytki wielodołkowej zawierającej przylegające komórki.

Potraktuj te komórki pożywką zawierającą tritiowaną tymidynę - radioaktywną wersję tymidyny - i inkubuj.

Podczas inkubacji aktywnie replikujące się komórki zawierają radioaktywną tymidynę. Ta tymidyna paruje się naprzeciwko adenozyny, generując znakowane radioaktywnie DNA w proliferujących komórkach.

Usuń zużyte media ze studzienek. Dodaj bufor do lizy, aby zlizować komórki i uwolnić DNA do zawiesiny.

Przygotuj zespół kombajnu komórkowego, umieszczając rurki zbiorcze kombajnu nad dołkami mikropłytki.

Zastosuj ciśnienie ssania, aby umożliwić aspirację zawieszonego DNA ze studzienek. To DNA osadza się na bibule filtracyjnej, tworząc określone plamki.

Wytnij szaty z bibuły filtracyjnej z plamkami DNA. Przenieść te czady pojedynczo do fiolek scyntylacyjnych.

Na bibułę filtracyjną nałożyć koktajl scyntylacyjny. Umieścić fiolkę w płynnym liczniku scyntylacyjnym.

Wewnątrz licznika znakowane DNA emituje energię w wyniku rozpadu radioaktywnego. Energia ta jest pochłaniana przez składniki koktajlu scyntylacyjnego. W końcu składniki koktajlu zaczynają przenosić impulsy, które z kolei są pochłaniane przez czujnik.

I