Ekstrakcja pęcherzyków zewnątrzkomórkowych: technika izolowania pęcherzyków zewnątrzkomórkowych z próbek całych tkanek za pomocą wirowania różnicowego
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 4:13 min. • April 30th, 2023
W całych tkankach pęcherzyki zewnątrzkomórkowe lub EV są uwalniane przez komórki do płynu śródmiąższowego. Należą do nich ciała apoptotyczne, mikropęcherzyki i egzosomy. Pojazdy elektryczne odgrywają ważną rolę w utrzymaniu komunikacji między komórkami.
Aby wyodrębnić EVs, zacznij od pobrania całej próbki tkanki.
Potraktuj tkankę odpowiednim buforem dysocjacyjnym. Składniki buforu dysocjacyjnego dezintegrują macierz zewnątrzkomórkową obecną w tkance, ostatecznie rozluźniając komórki.
Przenieś zawiesinę do homogenizatora i mechanicznie rozbij tkankę, aby ją rozdzielić i uwolnić komórki.
Następnie odwirować homogenat z niską prędkością, aby granulować komórki i fragmenty tkanek, podczas gdy EV pozostają w supernatancie.
Pobrać supernatant do świeżej probówki. Wirować z dużą prędkością, aby granulować większość większych ciał apoptotycznych, pozostawiając mniejsze EV w supernatancie.
Zebrać supernatant zawierający EV do strzykawki. Przefiltruj komponenty, aby usunąć wszelkie pozostałe ciała apoptotyczne i zbierz małą populację EV.
Odwirować filtrat, aby uzyskać EV w granulkach. Wyrzucić pozostały bufor i ponownie zawiesić osad EV w roztworze sacharozy. To rozwiązanie tworzy izotoniczn
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych