Oczyszczanie subpopulacji pęcherzyków zewnątrzkomórkowych: technika oczyszczania subpopulacji pęcherzyków zewnątrzkomórkowych za pomocą ultrawirowania w gradimencie gęstości
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 4:27 min. • April 30th, 2023
Pęcherzyki zewnątrzkomórkowe lub EV to nanowymiarowe, heterogeniczne, związane z błoną pęcherzyki wydzielane przez różne komórki, w tym komórki guza mózgu. Małe EV to subpopulacja składająca się z EV pochodzenia endosomalnego i rozdającego błonę.
Aby oczyścić małe pojazdy elektryczne, należy rozpocząć od pobrania wstępnie wyekstrahowanych pojazdów elektrycznych zawieszonych w buforze uzupełnionym sacharozą, który utrzymuje jednorodny roztwór i zachowuje integralność strukturalną pojazdów elektrycznych.
Do tego roztworu należy następnie dodać odpowiednią objętość jodiksanolu - obojętnego i nietoksycznego podłoża o gradiencie gęstości - aby osiągnąć pożądaną gęstość.
Jodixanol rozpuszcza białka zanieczyszczające, które mają być później usunięte.
Następnie dodaj warstwy roztworów jodixanolu o kolejno malejącej gęstości, aby utworzyć nieciągły gradient gęstości.
Odwirować probówkę z dużą prędkością.
W zależności od szybkości unoszenia się na powierzchni, gęstsze EV migrują do równie gęstej warstwy gradientowego ośrodka, podczas gdy mniej gęste EV migrują dalej do lżejszej warstwy, a najgęstsze zanieczyszczenia tworzą granulkę na dnie rury.
Teraz przenieś małe frakcje warstw gradientu d
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych