Izolacja astrocytów: metoda uzyskiwania czystego przygotowania astrocytów korowych myszy

Hodowla astrocytów in vitro pomaga badać biologiczną rolę astrocytów - najliczniejszych komórek mózgowych.

Zacznij od mózgu nowonarodka myszy umieszczonego pod mikroskopem preparacyjnym.

Usuń opuszki węchowe i móżdżek.

Wykonaj nacięcie w linii środkowej między dwiema półkulami, aby oddzielić korę.

Usuń opony mózgowe, aby uniknąć zanieczyszczenia w hodowli astrocytów przez fibroblasty i komórki opon

mózgowych.

Przenieś półkule kory mózgowej do lodowatego podłoża i zmiel na małe kawałki.

Zbierz kawałki kory mózgowej w probówce zawierającej trypsynę. Trypsyna, enzym proteazy, trawi białka adhezyjne komórek, ułatwiając separację komórek.

Wirować w celu granulowania strawionej tkanki.

Usunąć supernatant i dodać pożywkę astrocytów do osadu. Energicznie pipetować, aby uwolnić mieszaną populację komórek astrocytów, mikrogleju i komórek prekursorowych oligodendrocytów lub OPC.

Zawiesinę komórkową należy rozsiać w kolbie do hodowli tkankowej pokrytej polilizyną i inkubować.

Ujemnie naładowane komórki przyłączają się do dodatnio naładowanej polilizyny i rosną na całej powierzchni, tworząc zlewającą się warstwę.

Potrząsnąć kolbą, aby odłączyć luźno związany mikroglej i OPC. Usunąć supernatant