Hodowla komórek śródbłonka z mikronaczyń mózgu szczura: procedura izolacji i hodowli komórek śródbłonka z mikronaczyń mózgu szczura

Aby wyizolować komórki śródbłonka mózgu, najpierw przenieś pobrany mózg szczura do naczynia zawierającego schłodzony bufor.

Po usunięciu móżdżku i nerwów wzrokowych podziel mózg na półkule mózgowe. Następnie oddziel śródmózgowie od przodomózgowia.

Usuń opony mózgowe i istotę białą zawierającą mielinę z przodomózgowia, pozostawiając korę mózgową do izolacji mikronaczyń.

Następnie homogenizuj korę, aby rozbić tkankę nerwową i składniki.

Odwirować homogenat w celu usunięcia resztek komórkowych i mieliny.

Następnie należy potraktować osad tkankowy koktajlem trawiennym zawierającym kolagenazę, enzymy dyspazę i dezoksyrybonukleazę.

Kolagenazy i dyzazy trawią macierz zewnątrzkomórkową, która osadza mikronaczynia, rozluźniając fragmenty mikronaczyń z tkanki. Deoksyrybonukleazy rozkładają wolne DNA uwalniane z komórek poddanych lizie.

Wymieszać żądaną objętość strawionego homogenatu z pożywką o odpowiednim gradimencie gęstości i odwirować.

Odrzuć mielinę i najwyższą warstwę zawierającą komórki miąższowe mózgu, a następnie supernatant.

Teraz potraktuj osad zawierający mikronaczynie koktajlem wytrawiającym, aby całkowicie uwolnić fragmenty mikronaczyń zawierające komórki śródbłonka i perycyty