Izolacja komórek mózgowych z larw danio pręgowanego: technika uzyskiwania nienaruszonych neuronów, makrofagów i mikrogleju z tkanki mózgowej danio pręgowanego

Mózg danio pręgowanego składa się z neuronów - komórek nerwowych, które odgrywają znaczącą rolę w przetwarzaniu informacji. Dodatkowo obejmuje populację wspierających komórek odpornościowych, w tym makrofagów i mikrogleju, które zamieszkują przestrzeń międzyneuronalną.

Aby wyizolować wszystkie te typy komórek mózgowych od danio pręgowanego, najpierw weź znieczulone larwy danio pręgowanego na szalce Petriego zawierającej odpowiednią pożywkę.

Wizualizuj danio pręgowanego pod mikroskopem stereoskopowym i przetransektuj głowy larw powyżej woreczka żółtkowego, aby utrzymać mózg w stanie nienaruszonym.

Przenieść wycięte głowy do homogenizatora wypełnionego wstępnie schłodzonymi podłożami, umieszczonego na lodzie. Niska temperatura pomaga zapobiegać degradacji komórek mózgowych.

Za pomocą tłuczka zhomogenizuj tkankę mózgową danio pręgowanego. Homogenizacja dezintegruje macierz zewnątrzkomórkową i inicjuje dysocjację neuronów, makrofagów i mikrogleju od tkanki mózgowej.

Ten etap oddziela również mielinę - warstwę izolacyjną bogatą w lipidy - od neuronów.

Przepuść homogenat przez sitko, aby zatrzymać duże grudki komórek.

Odwirować filtrat w celu granulacji komórek i fragmentów osłonki mieli