Izolacja mikrogleju przez barwienie immunologiczne Sortowanie sprzężone z komórkami: metoda barwienia immunologicznego do izolowania mikrogleju z komórek mózgowych danio pręgowanego przy użyciu fluorescencyjnego sortowania komórek aktywowanych
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 3:50 min. • April 30th, 2023
W warunkach patologicznych aktywowany mikroglej - wyspecjalizowane makrofagi mózgowe - pomagają eliminować patogeny i resztki komórek. Te mikroglej wyrażają unikalne receptory, które odróżniają je od innych makrofagów.
Aby wyizolować mikroglej, zacznij od hodowli komórek mózgowych pochodzących od transgenicznego danio pręgowanego, wyrażającego określone cząsteczki fluorescencyjne w różnych typach komórek.
Kultura zawiera mieszaninę neuronów - wyrażających czerwoną fluorescencję, makrofagów - wyrażających zieloną fluorescencję i niefluorescencyjny mikroglej.
Teraz dodaj odczynnik blokujący i inkubuj kulturę z przerywanym mieszaniem. Odczynnik blokujący wiąże się z niespecyficznymi miejscami na komórkach i redukuje sygnał tła.
Następnie dodaj przeciwciała pierwszorzędowe i inkubuj. Przeciwciała te wiążą się ze specyficznymi receptorami ulegającymi ekspresji na powierzchni mikrogleju.
Odwirować kulturę i usunąć supernatant zawierający niezwiązane przeciwciała. Zawiesić osad komórkowy w nowym podłożu.
Następnie dodać przeciwciała drugorzędowe sprzężone z barwnikiem fluorescencyjnym i inkubować. Przeciwciała te wiążą się z przeciwciałami pierwszorzędowymi i nadają czerwony kolor komplek
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych