Generowanie indukowanych nerwowych komórek macierzystych (iNSC) z komórek jednojądrzastych krwi obwodowej (PBMNC): procedura oparta na wirusie Sendai w celu przeprogramowania PBMNC na iNSC

Aby przeprogramować komórki somatyczne w indukowane nerwowe komórki macierzyste lub iNSC - komórki macierzyste o wysokiej zdolności do samoodnawiania i różnicowania, zacznij od hodowli komórek jednojądrzastych krwi obwodowej w podłożu wolnym od surowicy w celu ekspansji erytroblastów.

Następnie odpipetować zawiesinę erytroblastów do płytki hodowlanej. Potraktuj komórki rekombinowanym wirusem Sendai lub SeV. Wirusy te kodują czynniki transkrypcyjne przeprogramowywane. Odwirować w celu osadzenia komórek i inkubacji.

Po fuzji SeV z błoną komórkową gospodarza genom wirusa ulega transkrypcji, a następnie translacji w cytoplazmie. Ektopowa ekspresja czynników transkrypcyjnych wyzwala proces przeprogramowania komórki bez integracji genów z genomem gospodarza.

Teraz odwiruj kulturę, aby usunąć wirusy. Ponownie zawiesić transdukowane komórki w odpowiednim podłożu, a następnie posiewać je. Ponadto odwiruj, aby usunąć zanieczyszczenia komórkowe. Zawieś ponownie komórki na nośniku iNSC.

Następnie zasiej komórki na płytce pokrytej białkiem. Komórki przyczepiają się do powłoki białkowej w płytce. Uzupełnij przylegające komórki pożywką iNSC co drugi dzień. Po tygodniu hodowli należy codziennie za