JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 4:07 min. • July 8th, 2025
Kropelkowa cyfrowa reakcja łańcuchowa polimerazy lub technologia dPCR dzieli reagenty pojedynczej reakcji PCR na miliony reakcji PCR z nanokropelkami. To masowe partycjonowanie, po którym następuje amplifikacja, wykrywa niewielką ilość zmutowanego DNA na dużym tle DNA typu dzikiego, umożliwiając wczesne wykrycie raka.
Na początek odessaj główną mieszankę dPCR zawierającą znakowane fluorescencyjnie oligonukleotydy wraz z innymi odczynnikami PCR i olejem stabilizującym kropelki. Dodaj tę mieszankę główną bezpośrednio na dno każdej studzienki w probówce paskowej PCR, aby uniknąć pęcherzyków powietrza. Następnie dodaj próbki DNA do mieszaniny reakcyjnej i kilkakrotnie pipetuj w celu wymieszania.
Teraz przenieś całą mieszaninę reakcyjną do specjalistycznego chipa przyrządu generującego kropelki. Zamontuj świeżą probówkę z paskiem PCR na przyrządzie do generowania kropel. Generator kropel łączy próbkę i olej, tworząc dyskretne nanokropelki z zamkniętym obszarem, który zapobiega zanieczyszczeniu krzyżowemu między kropelkami.
Po zakończeniu kropelkowania przenieś probówkę paskową PCR do termocyklera w celu amplifikacji docelowego DNA. Następnie załaduj produkt PCR do czytnika kropelek zawi
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych