JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 3:39 min. • July 8th, 2025
Obrazowanie raka mózgu in vivo polega na wstrzyknięciu znakowanych fluorescencyjnie komórek rakowych do mózgu myszy w celu obserwacji rozwoju guza. W celu znakowania fluorescencyjnego inkubuj komórki glejaka z cząsteczkami lentiwirusa. Wektor lentiwirusowy jest nosicielem genu białka fluorescencyjnego w podczerwieni, iRFP.
Wirus wiąże się z powierzchnią komórki glejaka i uwalnia RNA do komórki. Enzymy komórkowe przekształcają wirusowe RNA w dwuniciowe DNA, które integruje się z genomem komórkowym i umożliwia ekspresję iRFP. Maksima wzbudzenia i emisji iRFP leżą w obszarze bliskiej podczerwieni, w którym tkanki mają minimalną absorbancję i rozpraszanie. Pozwala to na dokładne obrazowanie tkanek głębokich.
Następnie usuń zużyte podłoże i dodaj trypsynę. Trypsyna, enzym proteazy, trawi białka adhezyjne, odrywając komórki od powierzchni kolby. Kilkakrotnie pipetować, aby oddzielić poszczególne komórki. Zebrać zawiesinę komórkową do probówki i odwirować. Teraz dodaj odpowiedni bufor, aby ponownie zawiesić osad.
Dozować zawiesinę komórkową do probówek cytometrii przepływowej i zabarwić komórki barwnikiem fluorescencyjnym DAPI. DAPI barwi jądro martwych komórek na jasnoniebiesko, odróżnia
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych