Współhodowla komórek glejaka na neuronach wzorcowych: technika monitorowania migracji komórek glejaka na neuronach hipokampa szczura in vitro

Glejak wielopostaciowy posiada komórki macierzyste, które migrują wzdłuż dróg aksonalnych mielinizowanych neuronów, aby zaatakować odległe miejsca w mózgu. Aby podsumować migrację komórek glejaka lub GBM na neurony in vitro, zacznij od pobrania szklanego szkiełka nakrywkowego.

Aktywuj szkiełko nakrywkowe za pomocą plazmy tlenowej i zagruntuj je środkiem funkcjonalnym. Zabieg ten zapewnia łatwy dostęp do substancji chemicznych w kolejnych etapach. Dodać roztwór PEGylowany do szkiełka nakrywkowego i inkubować. Roztwór ten pokrywa szkiełko nakrywkowe, zapobiegając zrostowi neuronów w losowych miejscach.

Naniec polimer fotoinicjatora na szkiełko nakrywkowe i zamontuj go w komorze obrazowania. Umieść komorę na stoliku mikroskopu fluorescencyjnego. Po wejściu do środka oświetlenie UV aktywuje cząsteczki fotoinicjatora lokalnie w wyznaczonych obszarach odpowiadających przewidywanym mikrowzorcom.

Aktywowane cząsteczki fotoinicjatora rozszczepiają leżącą pod spodem warstwę PEG, generując pożądany wzór. Teraz dodaj roztwór lamininy i inkubuj. Laminina - glikoproteina - osadza się w określonych miejscach, w których została usunięta warstwa PEG. Wysiewaj pożywkę zawierającą neurony hipokampa s