Izolacja naczyń włosowatych mózgu od ludzkiego mózgu: zoptymalizowana metoda ekstrakcji naczyń włosowatych mózgu z ludzkiej tkanki mózgowej
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 6:28 min. • July 8th, 2025
Naczynia włosowate mózgu są istotnym elementem bariery krew-mózg - półprzepuszczalnej bariery, która umożliwia selektywny ruch substancji rozpuszczonych między krwią a mózgiem. Aby wyizolować naczynia włosowate mózgu, zacznij od świeżej ludzkiej tkanki mózgowej. Usuń opony mózgowe i odetnij białą masę.
Zmiel tkankę mózgową na mniejsze fragmenty. Przenieść fragmenty do homogenizatora zawierającego odpowiedni bufor i homogenizować. Homogenizacja powoduje rozpad tkanek, uwalniając naczynia włosowate i resztki tkanek do roztworu.
Przenieść homogenat do świeżej probówki i dodać optymalną objętość pożywki o odpowiednim gradiencie gęstości. Odwirować roztwór, aby osadzać naczynia włosowate. Zbyt duża lub zbyt mała pożywka o gradiencie gęstości powoduje niską wydajność kapilarną. Usunąć supernatant.
Zawiesić osad w albuminie surowicy bydlęcej lub buforze uzupełnionym BSA. BSA stabilizuje enzymy trawienne i utrzymuje integralność strukturalną naczyń włosowatych. Następnie przefiltruj roztwór odpowiednim filtrem, aby usunąć duże naczynia i resztki tkanek.
Następnie przepuść filtrat przez mniejszy filtr siatkowy. Filtr ten zatrzymuje naczynia włosowate mózgu i przepuszcza mniejsze zanieczyszc
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych