Indukcja glejaka za pomocą transpozycji za pośrednictwem SB: technika generowania nowego modelu myszy przy użyciu integracji plazmidu SB za pośrednictwem transpozonu z mózgiem noworodka myszy
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 5:11 min. • July 8th, 2025
Zacznij od pobrania probówki zawierającej mieszankę plazmidów. Plazmid śpiącej królewny lub transpozonu SB jest zaprojektowany tak, aby przenosił transpozycyjny element składający się z onkogenu indukującego glejaka pochodzenia ludzkiego, umieszczonego między dwiema odwróconymi sekwencjami powtórzeń. Ponadto mieszanina ta zawiera plazmid transpozazy SB, który zawiera element wyrażający enzym transpozazy.
Teraz dodaj odpowiedni odczynnik do transfekcji do probówki. Odessać mieszaninę do wstrzykiwań do strzykawki wyposażonej w mikroigłę. Następnie zabezpiecz znieczulone szczenię myszy w pozycji leżącej na ramie stereotaktycznej. Wizualizuj obszar głowy szczeniaka, aby zlokalizować szwy czaszkowe. Umieść mikroigłę nad szwami czaszkowymi.
Wstrzyknąć mieszankę do komory bocznej - jamy w miąższu mózgu. Następnie roztwór ulega dyspersji w miąższu mózgu, gdzie cząsteczki odczynnika do transfekcji ułatwiają wnikanie plazmidów do komórek. Po wejściu do komórki plazmid transpozazy ulega ekspresji cząsteczek enzymu transporazy, które rozpoznają odwrócone sekwencje powtórzeń i wycinają element transpozonu.
Transpozycyjny element DNA następnie reintegruje się z regionem powtórzeń TA genomowego D
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych