Izolowanie naczyń mózgowych myszy: protokół izolowania nienaruszonych naczyń z próbki mózgu myszy
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 4:20 min. • July 8th, 2025
Naczynia mózgowe otoczone są warstwą ściśle połączonych komórek śródbłonka. Komórki te mają wokół siebie błonę podstawną wraz ze składnikami komórkowymi, takimi jak perycyty i astrocyty.
Aby wyizolować naczynia mózgowe od otaczających neuronów i komórek glejowych, weź zlewkę zawierającą mózg myszy zanurzoną w buforze homogenizacyjnym. Zmiel na małe kawałki. Homogenizuj tkankę mózgową, aby ją rozdzielić, uwalniając neurony, komórki glejowe i naczynia mózgowe. Zabieg ten zaburza również osłonkę mielinową otaczającą neurony.
Przenieść homogenat do probówki i odwirować w celu granulacji naczyń. Lżejsze składniki, takie jak neurony i komórki glejowe, pozostają w supernatancie, podczas gdy mielina tworzy gęstą warstwę interfejsową otaczającą osad.
Odrzucić supernatant i ponownie zawiesić osad w naczyniu z dołączoną warstwą mieliny w pożywce o odpowiednim gradimencie gęstości. Odwirować w celu osadzenia naczyń i uzyskać pasmo bogatej w tłuszcz mieliny unoszące się w górnej części supernatantu. Usunąć pasmo mielinowe wraz ze zużytą pożywką i ponownie zawiesić osad w nowym buforze.
Odcedzić przygotowane surowe naczynie za pomocą zespołu filtrującego zawierającego filtr na tyle mały, że nacz
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych