Test fagocytozy in vitro: metoda oparta na obrazowaniu na żywo do badania fagocytozy synaptosomy w czasie rzeczywistym za pośrednictwem astrocytów

Synaptosomy to izolowane frakcje neuronalne bogate w pęcherzyki synaptyczne. Te synaposomy są pochłaniane przez astrocyty - populację komórek odpornościowych w mózgu - w procesie znanym jako fagocytoza.

Aby zbadać fagocytozę za pośrednictwem astrocytów in vitro, zacznij od pobrania płytki hodowlanej zawierającej monowarstwę astrocytów. Teraz dodaj do płytki sprzężoną zawiesinę synaptosomów ze wskaźnikiem pH. Ten barwnik wskaźnikowy ma właściwość fluorescencji wyłącznie przy niskim pH. Inkubuj płytkę przez żądany czas.

Podczas inkubacji fosfatydyloseryna lub PS obecna na zewnętrznej błonie synaptosomu pozwala mu związać się z odpowiednimi receptorami PS na błonie astrocytów. Ułatwia to osadzanie się synaptosomów u podstawy. Odessać zużytą pożywkę wraz z niezwiązanymi synaptosomami z płytki.

Następnie uzupełnij płytkę w czynniki sprzyjające fagocytozie i inkubuj. Następnie zobrazuj płytkę za pomocą mikroskopu fluorescencyjnego. Po związaniu się z powierzchnią astrocyty pochłaniają synaptosomy, powodując ich wejście do fagosomów. Po dostaniu się do fagosomów niskie pH powoduje, że cząsteczki barwnika wskaźnikowego jasno fluoryzują.

Obrazowanie w czasie rzeczywistym ujawnia obecność ja