Elektroporacja ex vivo wycinków móżdżku zarodka pisklęcia: metoda wprowadzania plazmidowego DNA kodującego zielone białko fluorescencyjne w celu wizualizacji rozwoju komórek ziarnistych
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 4:21 min. • July 8th, 2025
Komórki ziarniste móżdżku są najliczniejszym typem neuronów w mózgu. Zewnętrzna warstwa ziarnista, EGL, składa się wyłącznie z prekursorów komórek ziarnistych, GCP, które różnicują się i migrują do wewnątrz, tworząc wewnętrzną warstwę ziarnistą, IGL.
Aby zobrazować rozwój komórek ziarnistych, przygotuj komorę elektroporacyjną, mocując anodę do podstawy szalki Petriego. Dodaj pożywkę hodowlaną, aby przykryć elektrodę. Teraz umieść wkładkę hodowlaną na elektrodzie pokrytej pożywką. Przenieś plastry móżdżku zarodka pisklęcia na wkładkę hodowlaną w orientacji strzałkowej.
Płaszczyzna strzałkowa pozwala na identyfikację warstwy docelowej - EGL na tle różnych warstw móżdżku. Dodać lepki roztwór barwnika zawierający plazmidowe DNA GFP na EGL. Plazmidowe DNA GFP koduje zielone białko fluorescencyjne, które rozprowadza się jednorodnie w cytoplazmie komórki i umożliwia obrazowanie żywych komórek.
Następnie umieść katodę w pożywce w pobliżu EGL, ale nie bezpośrednio na tkance. Następnie zastosuj wiele impulsów elektrycznych do różnych regionów EGL. Impulsy elektryczne indukują tymczasowe pory w błonie komórkowej, umożliwiając komórkom pobranie plazmidowego DNA. Następnie plazmidowe DNA umożli
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych