Elektroporacja pojedynczych komórek w organotypowych kulturach wycinków mózgu: technika in vitro dostarczania plazmidów do docelowych neuronów w wycinkach hipokampa mózgu

0 wyświetleń • 5:43 min. • July 8th, 2025

Rozpocznij elektroporację od pobrania szklanej pipety zawierającej żądany roztwór plazmidu. Przymocuj ją do uchwytu na mikropipety wyposażonego w elektrodę ze srebrnym drutem, upewniając się, że elektroda jest włożona do mikropipety. Weźmy komorę do elektroporacji zawierającą ultracienki fragment hipokampa zanurzony w sztucznym płynie mózgowo-rdzeniowym.

Zanurz elektrodę masową w płynie znajdującym się w komorze w celu późniejszej elektroporacji. Opuść końcówkę pipety do komory elektroporacyjnej i zapisz rezystancję podstawową. Użyj mikroskopu, aby umieścić końcówkę pipety w pobliżu celi docelowej. Gdy pipeta zetknie się z błoną neuronalną, jej opór gwałtownie wzrasta.

Zastosuj dodatnie ciśnienie powietrza, aby stworzyć niewielką wgłębienie w błonie neuronalnej. Szybko zastosuj łagodne ssanie, aby wypchnąć membranę do góry, tworząc luźne uszczelnienie między końcówką pipety a membraną. Powtórz ten proces jeszcze kilka razy, aby kondycjonować błonę i uniknąć lizy komórek.

Po kondycjonowaniu zastosuj silne ssanie, aby utworzyć szczelne uszczelnienie z membraną zwaną uszczelką gigaomową. Użyj impulsów elektrycznych, aby utworzyć przejściowe pory w uszczelnionym obszarze membrany. Otwo

Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych

Zaloguj się

Przeglądaj więcej filmów

Dostarczanie plazmidów