Izolacja neuronów rdzenia kręgowego: procedura gradientu gęstości w celu izolacji neuronów rdzenia kręgowego noworodków do badań in vitro

Aby wyizolować neurony rdzenia kręgowego, weź kręgosłup nowonarodzonej myszy i umieść go na szalce Petriego. Przepłucz kręgosłup buforem soli fizjologicznej, aby uwolnić rdzeń kręgowy. Przenieś rdzeń kręgowy do zimnego podłoża neuronalnego, aby ułatwić przeżycie komórki.

Następnie zmiel rdzeń kręgowy i przenieś fragmenty do rurki zawierającej świeże podłoże neuronalne. Inkubować probówkę w łaźni wodnej z wytrząsarką w celu aklimatyzacji. Po inkubacji usuń zużytą pożywkę i dodaj pożywkę do wytrawiania. Enzymy trawienne rozszczepiają macierz tkankową, aby rozluźnić komórki.

Wykonaj rozcieranie, odsysając fragmenty tkanki do pipety i szybko opróżnij składniki, uwalniając poszczególne komórki do zawiesiny. Następnie przenieść tę zawiesinę do probówki zawierającej pożywkę o gradientzie gęstości i wirówkę.

Po odwirowaniu powierzchowna warstwa probówki zawiera resztki tkanek. Pierwsza warstwa obejmuje oligodendrocyty i astrocyty. Druga i trzecia warstwa składają się z neuronów, przy czym trzecia warstwa ma najwyższą czystość. Wreszcie, osad zawiera komórki mikrogleju.

Zbierz trzecią warstwę do świeżej probówki i dodaj pożywkę neuronalną, aby rozcieńczyć pożywkę o gradiencie gęstości. Wiro