JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Biologia
0 wyświetleń • 3:44 min. • July 8th, 2025
Na początek umieść znieczuloną mysz w pozycji leżącej na desce sekcyjnej. Wykonaj nacięcie, aby uzyskać dostęp do jamy klatki piersiowej i odsłonić serce. Zlokalizuj aortę i jej gałęzie - lewą tętnicę szyjną wspólną i tętnicę ramienno-głowową. Przeciąć te tętnice, aby odizolować serce.
Natychmiast zanurz wycięte serce na szalce Petriego zawierającej bogaty w składniki odżywcze natleniony roztwór buforowy. Jednocześnie należy wprowadzić kaniulę do serca tak, aby jej końcówka sięgała do aorty wstępującej. Użyj szwu, aby podwiązać kaniulę. Podłączyć kaniulę do strzykawki zawierającej utleniony roztwór perfuzyjny.
Wstrzyknąć roztwór perfuzyjny do serca. Ten krok pozwala krwi opuścić tętnice wieńcowe i wypłynąć z żył płucnych. Następnie podłącz kaniulowane serce do aparatu Langendorffa. Użyj pompy perystaltycznej, aby przeprowadzić perfuzję przy stałym natężeniu przepływu.
W tych warunkach bufor przenika do serca. Powoduje to wytwarzanie ciśnienia kaniulacji, które zamyka zastawki aortalne, powodując przemieszczanie się buforu przez tętnice wieńcowe. W końcu bufor przenika do mięśnia sercowego wstecz, a później wylewa się przez żyły płucne. Pomyślnie perfuzyjne serce jest teraz gotowe do dalszych zastosowań.
Po eutanazji 8-10-tygodniowego samca myszy C57BL/6 użyj kleszczyków tkankowych, aby podnieść skórę mieczykowatego. Następnie za pomocą nożyczek do tkanek wykonaj niewielkie boczne nacięcie przez skórę. Wykonaj rozwarstwienie między skórą a powięzią. Przedłuż nacięcie skóry w kierunku pach w kształcie litery V po obu stronach i kontynuuj nacięcie przez klatkę piersiową.
Następnie za pomocą kleszczyków tkankowych zaciśnij mostek i odchyl klatkę piersiową do góry, aby w pełni odsłonić serce i płuca. Za pomocą zakrzywionych kleszczy oderwij osierdzie. Jeśli grasica zakrywa duże naczynia, użyj dwóch zakrzywionych kleszczy, aby rozerwać grasicę w obie strony. Następnie delikatnie pociągnij podstawę serca w kierunku ogona, aż aorta i jej tętnice odgałęziające będą widoczne jako naczynie krwionośne w kształcie litery Y.
Przeciąć aortę w lewej tętnicy szyjnej wspólnej. Następnie przetnij tętnicę ramienno-głowową. Wytnij serce i natychmiast zanurz je na szalce Petriego zawierającej roztwór Tyrode'a, aby umyć i wypompować pozostałą krew. Następnie przenieś serce na inną szalkę Petriego zawierającą roztwór 1.
Pod mikroskopem stereoskopowym, za pomocą cienkich nożyczek do tęczówki, przyciąć nadmiar tkanki. Usunąć pęcherzyki powietrza ze strzykawki. Następnie, przy pomocy dwóch prostych kleszczy wiążących, wykonaj wsteczną kaniulację aorty, uważając, aby cały proces kaniulacji odbywał się pod powierzchnią cieczy. Dostosuj głębokość kaniulacji tak, aby końcówka kaniuli znajdowała się w aorcie wstępującej, uważając, aby nie przeniknąć do zastawek aortalnych.
Następnie, za pomocą szwu 3-0 przed węzłem, podwiąż aortę do wcięcia kaniuli. Delikatnie wstrzyknąć roztwór 1 ze strzykawki, aby wypłukać pozostałą krew. Następnie podłącz kaniulowane serce do aparatu Langendorffa, uważając, aby nie wprowadzić do serca żadnych pęcherzyków powietrza. Po podłączeniu kaniulowanego serca do aparatu Langendorffa, należy perfuzjować serce roztworem 1 przez około 2 minuty.