JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Biologia
0 wyświetleń • 4:51 min. • July 8th, 2025
Zastawka aortalna serca jest strukturą trójpłatkową składającą się z komórek śródmiąższowych zastawki wewnętrznej lub VIC rozmieszczonych w gęstej macierzy zewnątrzkomórkowej i leżących nad nią komórek śródbłonka zastawki lub VEC.
Aby wyizolować VIC, najpierw przygotuj uśpioną mysz w pozycji leżącej. Przez nacięcie w linii środkowej brzucha i klatki piersiowej odsłonić serce. Zrób małe nacięcie między lewym przedsionkiem a komorą, a następnie wykonaj perfuzję soli fizjologicznej, aby odprowadzić krew. Przetnij aortę wstępującą na poziomie łuku aorty i zbierz serce.
Przeciąć i odrzucić dystalne dwie trzecie komór przed podłużnym wycięciem pozostałej części serca, aby odsłonić płatki zastawki aortalnej w kształcie litery U. Usunąć ulotki i spłukać schłodzonym buforem w celu usunięcia krwi.
Następnie potraktuj ulotki roztworem kolagenazy o niskim stężeniu i inkubuj. W niskich stężeniach kolagenaza - enzym proteolityczny - tylko częściowo rozkłada macierz zewnątrzkomórkową, usuwając powierzchniowe VEC z listków.
Odwirować i zastąpić supernatant zawierający enzym buforem, przenosząc zawieszony osad na szalkę Petriego. Zbierz ulotki i potraktuj je roztworem kolagenazy o wysokim stężeniu
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych