Kolonoskopowy model rany mysiej sterowanej: metoda izolowania łożyska rany wywołanej biopsją od jelita grubego, aby zrozumieć proces gojenia

Biopsje pod kontrolą kolonoskopii w modelach mysich indukują miejsca ran w okrężnicy. Te łożyska ran są izolowane do badań molekularnych i histologicznych w celu zrozumienia procesu gojenia się ran w chorobach zapalnych przewodu pokarmowego lub przewodu pokarmowego.

Aby rozpocząć izolację łożyska rany, umieść poddaną eutanazji eksperymentalną mysz z raną wywołaną kolonoskopią w pozycji leżącej. Naciąć skórę brzucha i leżące pod nią mięśnie, aby odsłonić jamę ciała.

Umieść zamknięte nożyczki pod okrężnicą i podnieś ją. Przetnij okrężnicę w jej środku i w odbycie, aby oddzielić ją od ciała. Przepłucz okrężnicę odpowiednim buforem, aby usunąć zawartość kału.

Umieść okrężnicę na bibule filtracyjnej i rozetnij ją wzdłużnie, stroną krezkową skierowaną w dół na bibule filtracyjnej. Teraz dodaj niebieski barwnik metylenowy na okrężnicę i obserwuj pod mikroskopem.

Barwnik barwi martwą i ziarnistą tkankę w łożysku rany, sprawiając, że wydaje się ona ciemniejsza niż otaczająca zdrowa tkanka, co pozwala na jej łatwą identyfikację. Zachowaj izolowane łożysko rany do badań ekspresji genów.

W odpowiednim punkcie końcowym doświadczenia otwórz warstwy skóry i mięśni brzucha, aby odsłonić jamę ciała zwierzęcia doświadczalnego, a następnie umieść zamknięte kleszcze pod okrężnicą. Delikatnie unieś okrężnicę, aby uwolnić ją z leżącej poniżej krezki, i przetnij tkankę w jej środku i przy odbycie, aby zebrać ją od myszy.

Użyj 20-mililitrowej strzykawki wypełnionej lodowatym PBS i wyposażonej w igłę do szczurzdalni, aby wypłukać zawartość kału i umieść oczyszczoną okrężnicę na kawałku bibuły filtracyjnej. Otwórz okrężnicę wzdłużnie, uważając, aby strona krezkowa przylegała do bibuły filtracyjnej i za pomocą pipety Pasteura pokryj błonę śluzową 0,2% błękitem metylenowo-białym.

Po kilku sekundach odcedź nadmiar plamy i obejrzyj okrężnicę pod mikroskopem preparacyjnym, aby zlokalizować łożysko rany. Użyj 4-calowych nożyczek z mikro tęczówką, aby przeciąć krawędź łóżka, uważając, aby nie przeciąć warstwy mięśniowej, i użyj cienkiej pęsety, aby przenieść wypreparowaną tkankę do probówki w celu szybkiego zamrożenia i/lub przechowywania.