Model pętli jelita krętego myszy: model chirurgiczny do badania przepuszczalności jelit u myszy

W warunkach patologicznych rozpad bariery nabłonkowej i śródbłonkowej zwiększa przepuszczalność jelit, powodując wyciek treści jelitowej do otaczającego układu krwionośnego i jamy brzusznej. Przepuszczalność jelit można symulować za pomocą modelu pętli jelita krętego.

Na początek przygotuj znieczuloną mysz w pozycji leżącej. Wykonaj nacięcie w linii środkowej brzucha. Umieść sterylną bawełnianą gazę zwilżoną odpowiednim buforem na obszarze operacyjnym, aby utrzymać narządy nawodnione podczas operacji.

Zewnętrznij jelito kręte - dystalną część jelita - i rozprowadź je na gazie, aby odsłonić krezkę. Zidentyfikuj dwa miejsca podwiązania w jelicie krętym, które są odpowiednio rozmieszczone w krezce i są pozbawione jakichkolwiek krytycznych naczyń krwionośnych. Następnie przebij krezkę, aby dodać ligatury w zidentyfikowanych miejscach.

Następnie wypreparuj jelito kręte, aby wytworzyć izolowaną pętlę jelita krętego z nienaruszonym dopływem krwi i błoną krezkową. Następnie wstrzyknąć odpowiedni bufor do pętli, aby wypłukać zawartość odpadów.

Teraz podwiązaj otwarte końce pętli jelita krętego. Użyj strzykawki, aby wstrzyknąć chemokinę - chemotaktyczną zawiesinę białkową - do pętli, powodując jej nadmuchanie. Wróć narządy do jamy brzusznej.

Zszyj nacięcie. Pozwól myszy na odzyskanie sprawności. W końcu cząsteczki chemokiny przechodzą przez ścianę jelita krętego do sąsiednich naczyń krwionośnych, powodując stan zapalny i napływ leukocytów.

Po uzyskaniu chirurgicznej płaszczyzny znieczulenia zacznij od wyszorowania sierści linii środkowej brzucha wacikami nasączonymi alkoholem lub gąbką z gazy nasączoną 70% etanolem. Nie zwilżaj dużego obszaru futra alkoholem, aby zapobiec hipotermii. Za pomocą nożyczek wykonaj laparotomię w linii środkowej. Wykonaj poziome nacięcie na środku brzucha i odsłoń otrzewną, uważając, aby nie uszkodzić narządów wewnątrzbrzusznych.

Umieść wstępnie przyciętą mokrą bawełnianą gazę na odsłoniętej jamie brzusznej. Użyj mokrych bawełnianych wacików, aby zmobilizować i zewnętrzizować kątnictwo i ostrożnie umieść je na mokrej bawełnianej gazie. Następnie zmobilizuj i delikatnie zewnętrznij jelito kręte. Rozłóż co najmniej 6 centymetrów końcowego odcinka jelita krętego na mokrej bawełnianej gazie, nie naruszając naczyń krezkowych i dopływu krwi.

Utrzymuj odsłonięte tkanki wilgotne przez cały czas ciepłym HBSS. Zidentyfikuj główną tętnicę zaopatrującą jelito kręte w krezce w pobliżu jelita ślepego. Następnie zlokalizuj dwa miejsca podwiązania w krezce, które są wolne od krytycznych naczyń krwionośnych. Mocno chwyć końcowe jelito kręte kleszczami tkankowymi i użyj kleszczyków z cienką końcówką, aby fenestrować krezkę, unikając naczyń krwionośnych.

Umieść jedwabny szew w poprzek perforacji i zawiąż węzeł chirurgiczny, aby utworzyć pierwsze podwiązanie. Użyj linijki, aby zmierzyć odległość 4 centymetrów od pierwszej ligatury i utwórz drugą ligatrę. Ostrożnie przeciąć obok każdego podwiązania cienkimi nożyczkami, aby odizolować 4-centymetrową pętlę jelita krętego, utrzymując nienaruszony dopływ krwi i błonę krezkową.

Delikatnie przepłucz zawartość segmentu pętli jelita krętego ciepłym HBSS za pomocą elastycznej żółtej rurki do karmienia dołączonej do 10-mililitrowej strzykawki. Upewnij się, że zawartość światła została wypłukana z jamy brzusznej, aby utrzymać miejsce operacji w czystości. Podwiązać dwa odcięte końce zaczerwienionej pętli jelita krętego za pomocą jedwabnego szwu.

Użyj 1-mililitrowej strzykawki z igłą o rozmiarze 30, aby powoli wstrzyknąć 250 mikrolitrów odczynnika, takiego jak FITC-dextrans lub chemokina do światła jelita. Pętla jelita krętego napompuje się, powodując umiarkowane rozdęcie błony śluzowej.

Zamknij ścianę brzucha za pomocą uchwytu na igłę, anatomicznych kleszczyków i niewchłanialnych szwów jedwabnych 3,0 z igłą do odwrotnego cięcia. Po wysuszeniu zwierzęcia, aby zapobiec hipotermii, umieść je w komorze anestezjologicznej o regulowanej temperaturze na okres inkubacji.