Transformacja genetyczna za pośrednictwem Agrobacterium: metoda genetycznej transformacji genomu ryżu za pomocą genetycznie modyfikowanych Agrobacterium tumefaciens
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 5:01 min. • July 8th, 2025
Agrobacterium tumefaciens, bakteria chorobologiczna dla roślin, może być genetycznie modyfikowana poprzez wprowadzenie sztucznie przygotowanego plazmidu Ti, przenoszącego interesujący go gen w swoim transferowym DNA lub regionie T-DNA oraz plazmid pomocniczy przenoszący geny wirulencji lub Vir do przenoszenia T-DNA do komórek roślinnych.
W przypadku transformacji genetycznej za pośrednictwem Agrobacterium zacznij od młodego kwiatostanu ryżu i pokrój go na małe kawałki. Przenieś sadzonki na pożywkę wzrostową i inkubuj, aby ułatwić wzrost sadzonek do niezróżnicowanej masy komórkowej zwanej kalusem.
Teraz przenieś kalus do pożywki infiltracyjnej Agrobacterium zawierającej acetosyringon - chemoatraktant dla Agrobacterium. Następnie dodaj kulturę genetycznie zmodyfikowanego Agrobacterium do pożywki i krótko inkubuj.
Cząsteczki acetosyringonu aktywują białko receptora komórkowego - VirA - na błonie Agrobacterium, które dodatkowo pośredniczy w fosforylacji białka aktywatora transkrypcji - VirG. Fosforylowany VirG przemieszcza się w kierunku plazmidu pomocniczego i aktywuje transkrypcję kaskady genów wirulencji, w tym białek kanałowych i endonukleaz - VirD1 i VirD2.
Białka kanałowe tworzą
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych