JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 3:59 min. • July 8th, 2025
W celu dostarczenia plazmidowego DNA opartego na elektroporacji do pierwotnych komórek nerwowych, należy rozpocząć od zawieszenia komórek w odpowiednich podłożach do elektroporacji. Dodaj plazmidowe DNA kodujące białka fluorescencyjne, aby przygotować mieszaninę do elektroporacji.
Delikatnie przenieś mieszaninę elektroporacji do kuwety do elektroporacji, unikając pęcherzyków powietrza, które mogłyby negatywnie wpłynąć na wydajność elektroporacji. Przenieś kuwetę do uchwytu kuwety elektroporatora; Ustaw parametry elektroporacji. Rozpocznij elektroporację.
Przyłożone krótkie impulsy elektryczne o wysokim napięciu w poprzek błony komórkowej powodują akumulację ładunku różnicowego po obu stronach błony, zwiększając potencjał transbłonowy, czyli napięcie przez błonę komórkową.
Gdy indukowany potencjał transbłonowy przekracza potencjał rozpadu dwuwarstwy lipidowej, dwuwarstwa lipidowa destabilizuje się wraz z miejscową zmianą konfiguracji, tworząc przejściowe pory hydrofilowe na błonie komórkowej. Pory o odpowiedniej wielkości zapewniają drogę dla plazmidowego DNA do wniknięcia do cytoplazmy komórki.
Po zakończeniu elektroporacji dwuwarstwa lipidowa ponownie się uszczelnia, przywracając
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych